ATP依赖的DNase特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")ATP依赖的DNase特价促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：ATP依赖的DNase特价促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN120510
英文名：ATP Dependent Dnase
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过*化铯/*乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。

产品特点：
1．使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2．此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以线性化的pMD18 DNA为底物，在1mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位。在10μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物(占60%)，可以提高阳性克隆的比率。

1．在微量离心管中配制下列反应液：

 

成分	样品	对照
10×反应Buffer	1μL	1μL
pUC18质粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依赖的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
3．70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
4．在微量离心管中制备下列酶切反应液：

成分	用量
10×H Buffer(客户自备)	1μL
第3步反应液	5μL
EcoR I(客户自备)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
6．在微量离心管中制备下列连接反应液：

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客户自备)	1μL
第5步酶切反应液	2μL
T4 DNA Ligase(客户自备)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反应1小时。

取上述连接反应液2～10μL，转化到JM109感受态细胞中，涂平板培养，进行蓝白菌落筛选并计数。实验结果表明，使用ATP依赖的DNA酶处理的pUC18质粒DNA混合物(含60％大肠杆菌基因组DNA片段)的自连结果中，白色菌落减少80%以上，有效抑制了大肠杆菌基因组DNA的污染。


我公司的ATP依赖的DNase特价促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·Southern专用DNA Marker(生物素标记)
编号：BTN120654A
英文名称：Southern DNA Marker(Labeled by Biotin)
规格：20次
本产品是用生物素标记的lambda/Hind Ⅲ DNA Marker，可以用做Southern杂交的Marker，便于准确确定杂交片段的大小。

产品特点：
1. 即开即用，非常方便。
2. 每个DNA片段显色强度均匀。
3. 如果探针用生物素标记，则必须用生物素标记的DNA Marker。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按常规方法制备琼脂糖胶和酶切基因组DNA。
2.上样。在胶的两侧的加样孔中各加入10μL本产品。
3. 按常规方法电泳。
4. EB或其他染料染色后UV 观察结果。
5.转膜。
6. 按常规的方法杂交和检测生物素的方法检测。

·葡萄球菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130842
英文名称：Staphylococcus RNA extraction kit
规格：50次
本产品是用生物素标记的lambda/Hind Ⅲ DNA Marker，可以用做Southern杂交的Marker，便于准确确定杂交片段的大小。

产品特点：
1. 即开即用，非常方便。
2. 每个DNA片段显色强度均匀。
3. 如果探针用生物素标记，则必须用生物素标记的DNA Marker。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 按常规方法制备琼脂糖胶和酶切基因组DNA。
2.上样。在胶的两侧的加样孔中各加入10μL本产品。
3. 按常规方法电泳。
4. EB或其他染料染色后UV 观察结果。
5.转膜。
6. 按常规的方法杂交和检测生物素的方法检测。


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·20×SSC溶液
编号：BTN100405
规格：250mL

·细胞核微量制备试剂盒
编号：BTN100601
英文名称：Nuclei Miniprep Kit
规格：50次
用高密度介质来分离动物软体组织(如肝脏、脾脏等)细胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年发明，其原理是细胞核的密度较大，在高速离心条件下(40000g 1小时)可在高密度介质(2.2mol/l 蔗糖溶液)中沉降下来，从而达到与细胞质其它成分分开的目的。该方法能通过一步离心得到较高纯度的细胞核，得到广泛应用。本产品就是在Chauveau方法的基础上优化改进而来。

产品特点：
1．基于密度梯度分离，可有效去除细胞质及其他细胞器，得到的细胞核纯净。
2．加进*化*、*化*、*化*(代"*")等改变分离介质渗透压的物质，减少了细胞核的脆性，增加了细胞核的完整性。
3．精心调节了介质的pH，防止细胞核在分离过程中的聚集，还能保持细胞核的精细结构。
4．快速，整个操作过程仅需1小时即可完成(对一个样品而言)。
5．提供染色试剂，可以在普通光学显微镜下检测纯化的细胞核的纯度。
6．处理温和，得到的细胞核中的大部分蛋白质都具有活性，可以用于胶迟阻实验、酶活性分析细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究；也可用于超大片段DNA的纯化。
7．不但适用于动物和植物培养细胞，还能用于实体组织(能用Dounce或Potter 匀浆器匀浆的组织均可)。
8．一次微量提取足够处理0.1 克组织或10E7个培养细胞，本产品足够50次微量提取。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	100ml
溶液A成分二(干粉)	约20g
溶液B成分一	50ml
溶液B成分二(干粉)	约100g
细胞核染色液	1套
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一、准备工作：先将溶液A的成分二(干粉)全部加入到溶液A成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到100mL溶液A。将溶液B的成分二(干粉)全部加入到溶液B成分一(溶液)中，摇晃溶解后得到50mL溶液B。4℃放置不能超过2 天，长期放置需要放-20℃。

二、微量细胞核分离(放量提取各试剂的用量可以按比例放大)：
1．对组织细胞：称取100～200mg 新鲜组织(如动物肝脏、脑、心肌和植物叶片等)，用自备的PBS或生理盐水洗净血水，滤纸吸干，用剪刀或刀片将其剪为碎块(最好大小为1cm3，过小反而不利于匀浆)放入小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内。
2．对培养细胞：用自备胰酶按标准方法消化培养细胞，PBS 洗涤，800×g 5～10分钟离心收集细胞，计数。每次微量提取需要5×10E7个细胞，加入1.0mL预冷的溶液A重悬细胞，然后转移到小容量Dounce或Potter 玻璃匀浆器内
3．用Dounce或Potter 组织匀浆器在冰上破碎组织或细胞。如果用手动匀浆器，一般需要20～30次。如果用电动匀浆器，一般需要处理3-5次，每次5～10秒钟(转速为500r/min)。
4．将匀浆液转移到离心管中。如果匀浆液有可见的结缔组织和未破碎的组织块，可以用三层自备的纱布放在1.5mL离心管管口，将匀浆液过滤进入离心管。可取少量滤液涂在载玻片上制得涂片A，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
5．4℃，700-800×g 水平离心5-10分钟。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片B，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
6．加入0.5mL预冷溶液A重悬沉淀。用预冷的匀浆器(用前需要将表面的组织洗去)重悬沉淀。可取少量上清液涂在载玻片上制得涂片C，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
7．在水平型离心管中加入0.5mL预冷的溶液B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重悬液。
8．在4℃ 23000g离心30分钟，管底的沉淀即为细胞核。
9．小心吸弃上清液。注意：上清一般比较粘稠，最好倒立一段时间。
10．用0.5mL溶液A重悬沉淀。
11．在4℃ 1500g离心5分钟，吸弃上清，沉淀即为纯净的细胞核。可以直接使用，也可以加等体积的自备甘油，混匀后放液氮或-70℃保存。可取少量上悬浮液涂在载玻片上制得涂片D，自然干燥涂片以便染色做显微镜观察。
12．用本方法一般可以从0.1g 肝脏组织中纯化到1-2×107个细胞核。如果后续试验是Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核后上样。

三、显微镜检测涂片，计算效率
1．将干燥后的A-D 四张涂片加入固定液固定15分钟，晾干。
2．Giemsa 染液染10分钟。
3．自备蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水。
4．用显微镜(40×)检查涂片，细胞核将呈紫红色，混杂的细胞质为浅蓝色碎片。根据每步细胞核的数量可以粗略估计回收效率。

疑难解答：
本说明书强烈建议用离心力g 而不是转速计算所需的离心速度，因为不同的离心机转子直径不同，即使是同一转速，其离心力也不同。如果只知道转速，可用下式计算离心力。
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以g(重力加速度)的倍数来表示；[rpm]２即转速的平方；
R为离心机转子的半径(单位为厘米)。


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·柱式Ti质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN130954
英文名称：Ti plasmid DNA column extraction kit
规格：50次

·大肠杆菌TB1感受态细胞
编号：BTN140645
英文名称：E.coli TB1 Rosetta Competent Cell
规格：10*100μl
 本感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21(DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET 系列质粒的表达，具有链霉素抗性。TB1感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

菌株基因型：F– ara Δ(lac-proAB)rpsL(Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700μl 无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

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