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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输,-20℃保存,保存期限为12个
- 保质期:
长期
- 英文名:
Instant Hotstart PCR MasterMix
- 库存:
658
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应BTN130986型即用型热启动PCR试剂盒哪里卖,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:BTN130986型即用型热启动PCR试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:Instant Hotstart PCR MasterMix
规格:1.5mL
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液,含有除引物、模板以外的所有PCR 试剂,包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等,特别适合于高保真PCR反应。
产品特点:
1. Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便,简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少,有利于减少污染,降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验,得到的PCR产物可用于平末端克隆。
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。
使用方法:
将本产品与用户自备的模板,引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR,反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL,各成分需要按比例增加或减少。
| 试剂 | 加入量 | |
| Hotstart PCR Mix | 25μL | |
| DNA模板(自备) | 哺乳动物基因组DNA | 0.5-1μg |
| 酵母基因组DNA | 5-500ng | |
| 细菌基因组DNA | 0.5-50ng | |
| 质粒DNA | 5-500pg | |
| PCR回收片段 | 1-100pg | |
| PCR引物(自备) | 10pmol each | |
| 补水到 | 30μL | |
放入PCR 仪中,根据用户确定的参数进行PCR,扩增结束后取5-10μL上样电泳。
注:用户可按照每1.5mL Hotstart PCR Mix中加入60μl 专用染料的比例将60μl 专用染料加入到1.5mL PCR MagicMix 3.0中,本染料对PCR扩增效率没有任何影响。扩增结束后,可直接取PCR反应液上样电泳,不需要额外再加DNA上样液。
注意事项:
1.如果反应体系不是30μl,各成分需要等按比例增加或减少。
2.如果DNA 模板中有PCR 不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物),可以在PCR 体系中加入1/10的PCR 抑制物清除剂(BTN60804,30μl 体系中加3μl),可能会对PCR 有帮助。
关于BTN130986型即用型热启动PCR试剂盒哪里卖的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·*化乙锭干粉(EB干粉)
编号:BTN100808
英文名称:Ethidium Bromide Powder
规格:1g
*化乙锭(Ethidium bromide,EB),分子式为C21H20BrN3,分子量为394.32,CAS号是1239-45-8。EB是深红色的芳香族荧光化合物干粉,有苦味。见光分解。
储存条件:常温运输及保存、避光,有效期两年。
·Karnovsky固定液
编号:BTN131226
英文名称:Karvovsky Fixative Solution
规格:250mL
Karnovsky固定液是组织化学中最常用的混合型固定液之一,主要成分含能快速渗透的多聚甲醛和缓慢渗透的戊二醛。它能很好保存组织的抗原性和精细结构,故尤其适用于电镜免疫化学样品的固定。本产品是在Karnovsky原始配方的基础上修改而得。
产品特点:
1.既可用于灌注法固定,也可用于浸泡法固定。
2.渗透能力强,固定均匀,组织收缩小,染色效果好。
3.适用范围广,可以用于固定从细菌、真菌,植物到动物的各种生物材料。
4.对原始配方进行了改良,不使用有毒的含砷化合物,减少了对操作者的毒害。
5.固定的组织经过包埋切片等处理用既可用于光学显微镜检测,也可用于电子显微镜检测。
储存条件:低温运输、4℃保存,保存期为1年。
使用方法:
1.对动物,最好先灌注固定,然后再浸泡固定10-30分钟。对植物、真菌、细菌、病毒、原虫等材料,直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky 固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2.固定后的组织洗涤后即可用于包埋、切片、染色、检测等后续操作。
BTN130986型即用型热启动PCR试剂盒哪里卖关键词:Instant Hotstart PCR MasterMix,即用型热启动PCR试剂盒,BTN130986
·IPTG溶液
编号:BTN80909
英文名称:IPTG Solution
规格:1.5mL
本产品为浓度为200mg/mL的无色液体。IPTG是β-半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时,或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X-Gal和IPTG,由于β-半乳糖苷酶的α-互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
·电泳级Tricine干粉
编号:BTN90311
英文名称:Tricine,EG Powder
规格:100g
本产品是电泳级的Tricine,即三(羟甲基)甲基甘*酸,主要用于多肽电泳时替代SDS-PAGE中的Glycine,故又叫Tricine-SDS-PAGE电泳。主要用于配制电泳液。
储存条件:常温运输和保存,有效期两年。
·UTP溶液(2.5mM)
编号:BTN131217
英文名称:UTP Solution,2.5mM
规格:2mL
UTP分子式为C9H12N2O15P3Na3,分子量是550.1,消光系数为10.0×103 M-1×cm-1(pH7.0),λmax为262nm。
储存条件:低温运输和-20℃保存、有效期一年。
·辛甲基β葡糖苷
编号:BTN131044
英文名称:Octyl-β-Glucoside
规格:1g
本产品是一种广泛用于溶解膜蛋白的非离子型去垢剂。低分子量,可通过透析去除。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
BTN130986型即用型热启动PCR试剂盒哪里卖关键词:Instant Hotstart PCR MasterMix,即用型热启动PCR试剂盒,BTN130986
·一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
编号:BTN70606
英文名称:One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
规格:30次
尿素-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA,尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此我们公司开发了本产品。
产品特点:
1.一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE,以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 尿素 | 210g |
| 丙*(代"烯")酰胺 | 60g |
| 甲叉双丙*(代"烯")酰胺 | 3g |
| TBE电泳液,10× | 250ml |
| TEMED | 1.5ml |
| 过硫*(代"酸")铵(干粉) | 1g |
| miRNAload | 10ml |
| miRNA Marker | 30次 |
| 固相RNase清除剂 | 100ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。
使用方法:
一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液:将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍,得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫*(代"酸")铵溶液:精确称取约100mg过硫*(代"酸")铵到一干净的1.5mL离心管中,按每1mg过硫*(代"酸")铵加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水,摇晃致溶,立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液,配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):
| 成分 | 终浓度 | 用量 |
| 尿素 | 7M | 42g |
| 40% Acrylamide/Bis溶液 | 15% | 37.5mL |
| 10×电泳缓冲液 | 1× | 10ml |
| 补RNase-free水到100mL | ||
注:Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
| 需分离的RNA长度范围 | Acrylamide/Bis工作浓度 |
| 6-100nt | 20% |
| 25-150nt | 15% |
| 40-200nt | 12% |
| 60-400nt | 8% |
| 80-500nt | 5% |
| 1000-2000nt | 3.5% |
3. 搅拌并加热到40-50℃左右,直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限,此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫*(代"酸")铵。注意:即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis,TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶,然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
三、电泳
1.在上样前,预电泳 20-30分钟以使多余的过硫*(代"酸")铵跑出加样空,同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右),有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合,70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却,快速离心半分钟,放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意:每次上样后如果不更换枪头,则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪,对 13cm×15 cm的胶,以20-30mA的电流电泳,直到红色染料移动到凝胶边缘为止;对 36cm×45cm的胶,则以50-60mA的电流电泳,直到红色染料移动到凝胶边缘为止。
四、后续处理
1.染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收:按上法用EB等染料染色后,UV下确定所需要的miRNA条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交:按上法用EB等染料染色后,UV下确定所需要的miRNA条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果miRNA样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保鲜膜,真空抽干,然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。
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