北京即用型高保真PCR试剂盒现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京即用型高保真PCR试剂盒现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京即用型高保真PCR试剂盒现货
英文名：Instant HiFi PCR MasterMix
规格：1.5mL
编号：BTN90708
产地：国产|进口
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR试剂，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。

产品特点：
1. Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

使用方法：
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL，各成分需要按比例增加或减少。

 

试剂		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10-20pmol each
补水到		30μL

参考扩增条件：

预变性	94℃	4min
PCR(30个循环)	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事项：
1. 本产品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反应速率低，因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb 需2 分种。
2. Pfu酶3´-5´外切酶活性可降解引物，所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后，立即放入PCR 仪中进行扩增，扩增完毕后立即进行电泳检测。
3. 本产品扩增产物为平末端，不可以直接进行TA 克隆，可以使用ClionB载体(BTN51104)进行克隆。如需要进行TA克隆，建议对PCR产物纯化后，用加A 试剂盒(BTN60105)加A后再进行TA克隆。
4. 由于Pfu 无 5´到 3´外切酶的活性，所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。

疑难解答：
Q：为何Pfu DNA Polymerase扩增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3´-5´的外切活性，所以在合成过程中，该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对，影响了合成效率；二是它能通过3´-5´的外切活性使引物部分降解，降低引物结合模板的能力，进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本产品时还有哪些注意事项？
A：1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR 长和高(考虑到被Pfu DNA Polymerase的3´-5´的外切活性降解的因素)；
 2.最好在反应前加Pfu DNA Polymerase。

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·茜素红S染色试剂盒
编号：BTN121105
英文名称：Alizarin Red S Staining Kit
规格：100mL
茜素红S染色试剂中的茜素红S可通过与*离子和其他金属离子发生鳌和反应而形成可以在显微镜下直接观察的带颜色的复合物。本产品就是基于此原理而开发。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要单独准备各种溶液。
2．操作简捷，性能稳定，显色清晰。
3．可用于组织切片中的*沉积，尤其适用于骨细胞或组织的病理和生理研究。
4．可用于检测动物原生代或培养细胞的*沉积。
5．本产品为通用型，不但用于*离子的检测，还可用于FeCl2和CdCl2的检测。

试剂盒组成：

成分	规格
茜素红S染色	100ml
茜素红S pH调节液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：试剂具有腐蚀性，操作时须带手套。实验时可以用含金属离子的切片或培养细胞作为阳性对照。可溶性蛋白会干扰茜素红S与*的相互作用，所以样品必须经过固定处理(以去除细胞中的可溶性蛋白)。对培养细胞，还必须洗涤去掉培养基(含血清等蛋白成分)。茜素红S与*的螯合反应需要在水相发生，因此加入茜素红S 前最好用水溶液洗涤掉前面操作所残留的有机溶剂。

一、茜素红S染色液的准备
1、根据所需检查的金属离子按下表选择茜素红S染色液的最佳pH。

金属离子	最佳PH	呈现的颜色
CaCl2，CaPO4、CaCO3	4.28-6.75	橙红
FeCl2	5.62-8.05	深紫
CdCl2	5.11-5.78	品红

2．用茜素红S pH调节液将茜素红S染色液调到所需的pH值。

二、染色载片上细胞
3．用缓冲中性福尔马林、福尔马林-乙醇混合液或乙醇作为固定剂固定铺在载玻片上的细胞(本试剂盒不提供上述固定剂)。
4．将细胞放入95%乙醇中处理。
5．将载玻片在空气中干燥。
6．将载玻片放在装有茜素红S染色液的染色缸中染色1-5分钟。注意：此步需要密切控制，最好每隔一分钟放在显微镜下检测，最佳时间随样品中盐离子的多少不同而不同。
7．用蒸馏水洗涤载片一次。
8．用丙*(代"酮")浸泡载波片30秒。
9．用丙*(代"酮")-二甲*混合液(50：50)浸泡浸泡载波片15秒。
10．肉眼可见红色或紫色(取决于所检查的离子)即可终止染色，放光学显微镜观察。*沉积阳性细胞将呈现桔红色。

三、染色石蜡包埋切片
11．按常规方法进行固定、包埋、切片、脱蜡和水化等操作，直到70%乙醇处理这步。注意：固定剂最好使用4%的副甲醛或10%福尔马林，切片厚度最好在0.4μm。
12．将切片浸入蒸馏水中。
13．将切片浸泡在茜素红S染色液中30秒-5分钟，具体时间以肉眼或显微镜下可见桔红色斑点为准。
14．用滤纸吸尽染色液后浸入丙*(代"酮")20次。
15．再进入丙*(代"酮")-二甲*混合液(50：50)20次。
16．最后用二甲*处理并用封固剂封片。

四：染色细胞培养(最好是26或6孔培养板培养的细胞，便于在显微镜下观察)
17．小心抽去培养液，注意不要吸走细胞。
18．沿壁上缓慢加入1-2mL自备的1×PBS或HBSS缓冲液，然后再小心将加入的液体吸出。
19．每孔中加入自备的无水乙醇直到全部覆盖细胞，室温放置30分钟后小心移弃无水乙醇，室温晾干。此步用于固定细胞。也可用10%甲醛代替无水乙醇，但固定时间只需要15分钟，同时还需要用蒸馏水洗涤3次才能进入下一步。每次洗涤时，先加入蒸馏水，再浸泡5-10分钟，然后小心吸走蒸馏水。注意：操作时不要破坏细胞单层。
20．每个细胞培养孔中加入1mL 茜素红S染色液，在室温下孵育至少20分钟，最后小心吸走茜素红S染色液。
21．加入1mL蒸馏水，然后小心吸走蒸馏水。此为洗涤步骤。注意：洗涤一定不要震荡以避免形成的*沉积物脱落。
22．重复上步操作3次(共洗涤4次)。
23.样品可立即用于显微镜检测。有*沉积的细胞将呈现桔红色。


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·酵母tRNA溶液(粗提)
编号：BTN70904A
英文名称：Yeast tRNA Solution
规格：1.5mL
本产品分粗体液和精提液两种类型，浓度均为5mg/mL。A是酵母tRNA粗提液，用作制备更高纯度(如分子生物级)酵母tRNA的原材料。B是精提液，是经过本公司柱式RNAadsorp纯化的分子生物学级别的酵母tRNA溶液，不含蛋白质和DNA污染，OD260/OD280在1.9左右，可直接用作微量RNA提取和回收的助沉剂，也可以用作原位杂交、Northern杂交的封堵剂，对于探针为RNA的杂交试验尤其适用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：以tRNA粗提液(BTN70904A)为材料，酚法制备tRNA精提液(BTN70904B)
1.在1倍体积的tRNA粗提液中加入一倍体积的自备Tris饱和酚，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
2.在上清中再加入一倍体积的自备Tris饱和酚和0.2倍体积自备的*仿，振荡混匀后12000～15000g离心3分钟得上清。
3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要2-4次抽提。
4.在上清中加入0.1倍体积的自备3M NaAc(pH5.2)和2倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL自备 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自备的DEPC水中，UV测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。
注意：tRNA比较短，又是单链，所以电泳时结合EB等染料的能力很弱，测定其浓度时最好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。
注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果最后得到的溶液带颜色，则需要用本公司柱式RNAadsorp精提，详细过程见该产品使用说明书。

二：tRNA精提液(BTN70904B)作为核酸助沉剂
1.在核酸(DNA或/和RNA)溶液中，加入适当浓度的盐离子，盐离子不同其终浓度也不相同，具体如下：

盐	终浓度
NH4OAc(醋酸铵)	0.5M
NaCl(*化*)	0.25M
NaOAc(醋酸*)	0.3M

2. 加入本产品使其终浓度为20μg/mL，混合均匀。
3. 加入两倍体积的乙醇，混合均匀。
4. 冰上放置15分钟。
5. 12000～15000g离心15分钟以上，小心移弃上清。
6. 用1mL 75%乙醇洗一次(即加入1mL 75%乙醇，振荡混匀后12000～15000g离心5分钟，小心移弃上清)。
7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体。
8. 将沉淀溶于适当缓冲液中待用。
注：由于tRNA是多聚核苷酸激酶和末端转移酶的底物，因此如果回收的DNA或RNA要用于此类反应，就不能使用tRNA作为助沉剂。如果回收的RNA要用于RT-PCR，使用tRNA可能会对反应的特异性产生干扰。

三：tRNA精提液(BTN70904B)作为杂交封堵剂
本产品可以作为原位杂交、Northern杂交和RNA斑点杂交的封堵剂，也可以作为Southern杂交和DNA 斑点杂交的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为100μg/mL。
如果使用RNA探针，最好使用本产品做封堵剂，以保护RNA探针。


北京即用型高保真PCR试剂盒现货关键词：即用型高保真PCR试剂盒,BTN90708,Instant HiFi PCR MasterMix

二硫代草酰* Polyarabinogalactan 79-40-3
*基黑10B 3-Aminobenzoic acid 1064-48-8
002012 枸橼酸纳抗凝兔血 100ml|500ml
F030805 BIOTIN标记山羊抗小鼠IgG抗体 Goat Anti-Mouse IgG*BIOTIN
PY02-050  高盐甘露醇培养基  250克  
F020215 兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG
BL0869 羊抗大鼠免疫血清
ARB12246 大鼠血管生成素受体TIe1(ANG-R-TIe1)Elisa方法检测 Rat angiopoietin receptor tie1,ang-r-tie1 ELISA KIT
变旋酶 Streptozotocin 9031-76-9
ARB13321 山羊促黄体生成素(LH)酶标法分析 
ARB10444 人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa检测说明书 Human alpha-fetoprotein,afp ELISA KIT
M0110 TMB-2HCL                    
1,3,5-三** Maltose Phosphorylase 626-39-1
C0301 优级新生牛血清(无菌过滤)
F020226 兔抗猫IgG抗体 Rabbit Anti-Cat IgG
F030839 BIOTIN标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*BIOTIN
BL1214 0.4%吕氏碱性美蓝染色液
DL-丙*酸 Diphenylcarbinol 302-72-7
ARB10206 人β2糖蛋白1抗体IgM(β2-GP1 Ab IgM)代做ELISA实验 Human β2-glycoprotein 1 antibody igm,β2-gp1 ab igM ELISA KIT

我公司强烈推荐核酸扩增(PCR)系列产品，热情期待您的咨询选购北京即用型高保真PCR试剂盒现货。