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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃
- 保质期:
一年
- 英文名:
Total RNA Extraction Reagent
- 库存:
200
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京SY0269型总RNA提取试剂(同Trizol)优惠促销在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京SY0269型总RNA提取试剂(同Trizol)优惠促销
品牌:百奥莱博
规格:100ml
英文名:Total RNA Extraction Reagent
产地:国产|进口
本产品是一种用于各种动植物、细菌组织/细胞总RNA抽提的试剂,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,保持样品中RNA的完整性,有效抑制RNA的降解。样品在该试剂中能够充分被裂解,在加入*仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层 (鲜红色下层),RNA分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可回收得到Total RNA。提取的总RNA纯度高,基本不含蛋白质及基因组DNA, 可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。
此外,在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
本品操作简单快速,所有操作可以在一小时内完成。且对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。
注意事项
1)需自备*仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇 (DEPC水配制)、DEPC和DEPC水。
2)戴一次性干净手套;在单独的洁净的区域操作;在操作过程中避免讲话,以防实验者汗液、唾液中的RNase的污染。
3)请尽量使用RNase free的实验器具,包括枪头和离心管。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.1% 的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。RNA实验用的器具和试剂应专门使用,不要用于其它实验。DEPC水建议分装后保存。
4)本产品中含有*酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本产品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗;
5)样品用Total RNA Extraction Reagent 匀浆后,如果不即刻加入*仿进行下游实验,可先于-70℃下冻存,可保存一个月以上。另保存在75%乙醇中的RNA沉淀,可于4℃保存1周,-20℃保存1年。
6)RNA半衰期比较短,易降解,建议抽提后尽快进行后续实验。
储存条件:4℃,避光,有效期一年。
参考用量
表1 每1 ml Total RNA Extraction Reagent 能够充分裂解的最大样本量如下:
| 贴壁细胞 | 10 cm2培养面积 |
| 悬浮动植物细胞或酵母细胞 | 5×106-1×107个 |
| 细菌 | 107个 |
| 全血 | 50 μl |
| 动物组织 | 30-100 mg |
| 植物组织 (多糖和多酚含量不高的) | 50-100 mg |
*过多的样本量可能会导致裂解不充分,并使产物纯度降低。
操作流程
1 样品的处理
1.1 样品的匀浆
A. 贴壁细胞
尽量弃去培养液,直接往直径3.5cm的培养板中加入1ml Total RNA Extraction Reagent 覆盖并反复吹打裂解细胞。
【注】:
1)依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定所需的Total RNA Extraction Reagent 量(每10cm2 加1ml)。
2)当加入Total RNA Extraction Reagent量不足时可导致抽提的RNA有DNA污染。
3)贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全裂开,并已释放RNA,继续后续实验即可。
B. 悬浮细胞
离心收集细胞,每5×106~1×107个细胞加入1 ml Total RNA Extraction Reagent,用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
【注】:在加入Total RNA Extraction Reagent前避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
C. 动/植物组织
取新鲜动植物组织或-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨,按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent 混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎,加入适当Total RNA Extraction Reagent量,匀浆仪进行匀浆处理。
【注】:样品体积一般不要超过Total RNA Extraction Reagent体积的10%。
1.2 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
1.3(可选)在4℃条件下,12000rpm 离心10min,取上清。
【注】:如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂应尽量去除,取澄清的匀浆液进行后续实验。
2 总RNA提取
2.1 向上述裂解液中加入1/5体积的*仿。盖紧离心管盖,剧烈震荡15秒,室温静置2-3min。
2.2 12,000 rpm 4℃ 离心10-15分钟。
【注】:
1)离心后混合物可分3层:上层无色水样层,中间层,下层红色有机*酚*仿层。RNA无一例外的存在于水样层中。
2)该部分容量大约为所加Total RNA Extraction Reagent 总量的50-60%。如用1 ml Total RNA Extraction Reagent提取,上层水相约为500-600 μl。建议吸取400-500 μl,不要吸的太完全,以防吸到中间层导致基因组污染。
3)有机相和中间层是蛋白和DNA,如有需要,请予以保留,并进行相关纯化实验。
2.3 小心吸取上层水相至一个新的离心管中,加入等体积的异丙醇。颠倒混匀后室温放置10min。(RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。)
2.4 12,000rpm 室温或4℃ 离心10分钟。
2.5 小心弃去上清,加入1 ml用DEPC水配制的75%乙醇。充分洗涤管盖和管壁,并轻弹管底,让沉淀悬浮起来。每使用1ml Total RNA Extraction Reagent 用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
2.6 12,000 rpm 室温或4℃ 离心3分钟,弃去上清,注意不要丢失RNA沉淀。
【注】:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
2.7 室温放置2-3min,晾干。加入30-100ul RNase free water(DEPC水),待完全溶解后,取少量检测,其余在-70℃保存。
3 产物检测
A. 完整性检测
1)取1 μl RNA加入适当 10×DNA loading buffer,混匀。
2)进行1% 琼脂糖凝胶电泳。若能看见清晰的三条带,证明RNA完整性较好。
【注】:如果是普通的琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。
B. 纯度检测
检测260 nm,280 nm OD值,并计算OD 260/OD 280。纯的RNA的比值应在1.8-2.2之间。
应用举例
分别利用本品Trieasy和Trozol从胶质细胞中提取Total RNA,利用1%琼脂糖凝胶电泳检测,所提取RNA具有较好完整性, OD值均>1.9。
北京SY0269型总RNA提取试剂(同Trizol)优惠促销极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·FXR-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0128
英文名称:FXR Luciferase Reporter Plasmid
规格:1μg
FXR-Luc荧光素酶报告基因质粒(FXR luciferase reporter plasmid)是用于检测FXR转录活性水平为目的的报告基因。
FXR(farnesoid X receptor)是一种多功能核受体,能参与机体多种生理活动的调节,包括胆汁酸代谢、脂代谢、糖代谢、肝脏保护等过程。
FXR-Luc荧光素酶报告基因质粒主要应用于Farnesoid X Receptor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。
pGMFXR-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个FXR结合位点,可以高灵敏度地检测FXR的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得FXR报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱
使用说明
pGMFXR-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
储存条件:-20℃。
北京SY0269型总RNA提取试剂(同Trizol)优惠促销关键词:总RNA提取试剂(同Trizol),Total RNA Extraction Reagent,SY0269
·HRP标记小鼠抗HA-Tag单克隆抗体
编号:SY0654
英文名称:HRP-conjugated HA-Tag, Mouse mAb
规格:20μl(>50次)
本品为HRP标记小鼠抗HA-Tag单克隆抗体,HRP标记小鼠抗HA标签单克隆抗体。推荐稀释比例:WB(1:1000~10000)。
人流感病毒血凝素(Human influenza hemagglutinin, HA)是决定人病毒传染性的一类表面糖蛋白。HA标签(HA-Tag)来源于HA分子对应的98-106位*基酸(YPYDVPDYA ),广泛用作表达载体的通用表位标签。许多融合蛋白经基因工程重组后表达HA tag,且融合蛋白本身的生物活性和体内分布并不会受影响。 其他常用的标签还包括myc、Flag、His、GST等,标签的使用简化了蛋白的检测,分离和纯化。
本抗体特异性识别HA Tag,不仅利于检测带HA Tag的融合蛋白的表达量,另外还利于后续对融合蛋白的分离纯化。
产品类型(Product Type):Mouse ascites monoclonal antibody (Mouse mAb)
反应性:All
宿主:Mouse
应用:WB
缓冲液:1 mg/ml in Phosphate buffered saline (PBS) with 0.05% sodiu*(代"m") azide, pH 7.2
纯化:亲和纯化; Purity:>95%(SDS-PAGE)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
北京SY0269型总RNA提取试剂(同Trizol)优惠促销关键词:总RNA提取试剂(同Trizol),Total RNA Extraction Reagent,SY0269
BTN130647 尿嘧啶糖基化酶抑制剂 Uracil Glycosylase Inhibitor(UGI)
SJ0809 D(+)鼠李糖
D-苏*酸 Melibiose 632-20-2
ARB12216 大鼠血小板生成素(TPO)ELISA代测服务 Rat thrombopoietin,tpo ELISA KIT
ARB10530 人鸟苷酸结合蛋白4(Gbp4)elisa测定使用说明书 Human guanylate nucleotide binding protein 4,gbp4 ELISA KIT
BTN100823 干粉型SOC培养基 SOC Medium Powder
ARB11187 人孤腓肽(OFQ/N)血清中含量检测 Human orphanin fq/nociceptin,ofq/n ELISA KIT
ARB13959 猪热休克蛋白90(HSP-90)酶标法分析 Porcine heat shock protein 90,hsp-90 ELISA KIT
ARB10245 人乙型肝炎病毒前S2抗体(HBV preS2Ab)定量分析 Human hepatitis b virus,hbv pres2ab ELISA KIT
ARB10077 人CD4分子(CD4)Elisa方法检测 Human cluster of differentiation,cd4 ELISA KIT
F030425 胶体金标记兔抗豚鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Guinea Pig IgG*GOLD
F030703 BIOTIN标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*BIOTIN
PY02-043 Baird-Parker琼脂基础 250克
ARB10374 人甘露聚糖结合凝集素相关丝*酸蛋白酶(MASP)elisa检测说明书 Human mannan binding lectin associated serine protease,masp ELISA KIT
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