10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)北京价格

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名称：10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂)北京价格
英文名：10×RIPA Lysis Buffer (Medium),without enzyme inhibitors
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本品属于裂解强度居中的RIPA裂解液，裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。本品为10倍浓缩液，使用时需稀释成1×工作液。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

注意事项
1）本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 细胞样品
1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
【注】：如需加入PMSF，请在使用前数分钟内加入，使其最终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
【注】：如需加入PMSF，请在使用前数分钟内加入，使其最终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

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·细胞膜可渗透*离子荧光探针
编号：SY0553
英文名称：Fura-2, AM, Cell Permeant
规格：50μg
Fura-2是细胞生物学常用的一种*荧光探针，能特异性地结合Ca2+（结合比例为1:1），同时可发出荧光，结合Ca2+后的最大激发波长从结合前的380nm向340nm（Ca2+饱和时）偏移，其发射荧光强度与结合Ca2+的浓度存在定量关系。一般用340nm和380nm波长激发Fura-2，通过使用与两种激发对应的荧光强度比率来计算细胞内的*离子浓度，这种比率测量方法可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。Fura-2与Indo-1已成为目前使用最广泛的比率测量的*荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多，但Fura-2特别适合于数字成像显微镜，使用该设备可更方便的调整激发波长，使探针结合*离子后在300-400nm的激发波长范围内扫描Fura-2的吸收偏移，在510nm处检测发射波长。

由于Fura-2是极性大的酸性化合物，无法进入细胞内，为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯，使其成为Fura-2/AM，该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷，极大的提高了细胞渗透性。在细胞内，Fura-2/AM被酯酶水解成Fura-2后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。

CAS：108964-32-5
分子式：C44H47N3O24
分子量：1001.86
Ex/Em：363nm/512nm
溶解性：溶液DMSO.
储存条件：-20℃避光干燥。
结构式



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