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M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")逆转录酶厂家直销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:逆转录酶厂家直销
规格:5000U
产地:国产|进口
编号:SY0293
品牌:百奥莱博
本品适用于第一链cDNA合成,cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性,该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA,本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶,即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase,与M-MuLV相比,不仅改善了模板RNA可能被降解情况,且具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。
注意事项
1)为保证反转录成功,建议使用高质量的RNA样品。
2)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。
3)如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5min,冰上冷却,短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用方法
1第一条链cDNA合成(以20μl反应体系为例)
1.1 按照表【1】配制反应体系
RNase free ddH2O | to 20μl |
5×Reaction Buffer | 4 μl |
dNTP Mixture (10 mM each) | 1 μl |
Oligo(dT)18(0.5μg/μl) | |
or Random hexamer (0.1μg/μl) | |
or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM) | 1 μl |
RNase inhibitor (40 U/μl) | 0.5 μl |
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase | 1 μl |
模板RNA | Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng |
表1 cDNA第一条链合成反应体系表 |
cDNA模板 | 2μl | 依需要调整 |
Forward Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
10×Taq Buffer(含Mg2+) | 5 μl | 1× |
2.5mM dNTPs | 4μl | 0.2 mM |
Taq DNA Polymerase | 0.5μl | 2.5units |
ddH2O to final volume | 50μl | / |
表2 RT-PCR反应体系表 |
北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购逆转录酶厂家直销。
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