环状DNA全基因组扩增试剂盒哪里买

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百奥莱博专业生产供应环状DNA全基因组扩增试剂盒哪里买，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：环状DNA全基因组扩增试剂盒哪里买
英文名：Circular DNA Whole Genome Amplification Kit
编号：BTN100947
品牌：百奥莱博
规格：30次
产地：国产|进口
本产品基于WGA的、专门用于环状DNA(如质粒)扩增的全基因组扩增试剂盒，优化后的反应体系对环状DNA全基因扩增有良好的效果，可以方便、简单、快速、经济的得到环状DNA样品的扩增产物。

产品特点：
1. 线状DNA清除剂可以清除残留的线状DNA，保留环状DNA，包括超螺旋DNA、带裂口(nick)的环状DNA和带缺口(gap)的环状DNA。
2. WGA采用基于phi29 DNA聚合酶的MDA法，能得到平均长度在10Kb以上的扩增产物，还具有高产量和高保真性的特点。
3.可以将环状DNA扩增上万倍，是保留珍贵痕量DNA样品的唯一办法。
4.可使用各种环状DNA样品，包括质粒DNA，环状病毒DNA，线粒体DNA等。
5. 操作简便快捷，恒温(30℃)反应，无须PCR仪即可实现扩增。
6.产物可用于多种后续试验，包括酶切、克隆、文库构建、测序、基因芯片分析等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
线状DNA清除剂溶液A	100μl
线状DNA清除剂溶液B	30μl
WGA DNA变性液	75μl
WGA溶液A	150μl
WGA溶液B	300μl
Phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μl
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、去除环状样品中的线状DNA(线状DNA量不超过5μg)
1.在干净塑料离心管中，按下表加入各成分(30μL体系)：

成分	样品	正对照	负对照
自备DNA样品(1-10μg)	(样品)	(用环状DNA)	(用线状DNA)
线状DNA清除剂溶液A	3μL	3μL	3μL
线状DNA清除剂溶液B	1μL	1μL	1μL
	补水到30μl	补水到30μl	补水到30μl

2. 加200μL石蜡油后，37℃保温16小时。注意：保温时间过短可能会形成短的DNA片段，影响后续反应，所以最好保温16小时。必须加石蜡油，否则长时间保温期间水分会蒸发到管盖上。如果使用热盖打开的PCR仪则可以不加石蜡油。
3. 65℃加热灭活线状DNA清除反应的酶。
4.电泳检测酶切效果。本产品不清除带裂口(nick)和带缺口(gap)的环状DNA(如质粒)，所以这些片段将不会消失。如果所含线状DNA超过5μg，则需要用非酶线性DNA清除剂清除或者稀释后用本法处理。
5. WGA扩增需要100pg-100ng的环状DNA，一般环状DNA的浓度都高于此范围，则需用超纯水将DNA稀释到40pg-40ng/μL，稀释过程中线状DNA清除反应中的成分也相应稀释，故一般不会影响后续WGA反应。如果样品中DNA浓度过低，则需要用微量核酸沉淀剂(需另买)沉淀后再溶解到适当体积的超纯水中，沉淀过程中线状DNA清除反应中的成分也被去除。

二、碱变性(对环状DNA，碱变性法一般优于热变性法，推荐用户使用)
6.在PCR塑料管中加入不超过2.5μL环状DNA样品。如果体积不足2.5μL，则用超纯水补齐。最好同时做一个不加样品的阴性对照。
7. 加入等体积(2.5μL)WGA DNA变性液，轻柔吹打混匀。
8.室温放置2分钟变性。
9. 加入5μl WGA溶液A，轻柔吹打混匀后立即进入第15步。注意：热变性的DNA样品不能久存，否则DNA会缓慢复性，所以必须马上进入后续处理。

三、热变性法
10.在PCR塑料管中加入1-5μL纯化好的环状DNA，用量在100pg-100ng之间。最好同时做一个不加DNA模板的阴性对照。
11. 加入5μL WGA溶液A，轻柔吹打混匀。
12. 如果不足10μL，补水到10μL。
13.在PCR仪器上 95℃加热变性3～5分钟，其间最好打开PCR仪的热盖。也可以使用95℃水浴加热3分钟。
14. 热变性结束后短暂离心(将蒸发到管壁的水甩下)，然后将样品管在冰上放置至少5分钟，立即进入第15步。注意：热变性的DNA样品不能久存，否则DNA会缓慢复性，所以必须马上进入后续处理。

四、WGA反应
15.在10μL碱变性或热变性的DNA样品中，加入10μL的WGA溶液B，轻柔吹打混合均匀。
16. 加入0.5μL Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)，轻柔吹打混合均匀。
17. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入50μL石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
18. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
19. 立即取2-5μL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。
20.扩增的DNA可以用于后续试验或放冰箱长期保存。

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·蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合液Ⅱ
编号：BTN130525
英文名称：Phosphotase Inhibitor Cocktail 2
规格：1mL
组织/细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白*(代"磷")酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，导致不同于正常生理状态的差异，影响实验结果。因此，加入外源性蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂，抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，维持蛋白质的磷酸化状态，是Western Blotting、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质和蛋白激酶活性测定等研究不可缺少的一步。本产品就是针对这一用途开发。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分然后再配制。
2. 由多种蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂组成，各成分的浓度经过精心优化。
3. 抑制谱广，能特异性地抑制酪*酸磷酸酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶，最大限度保持蛋白质磷酸化。
4.与各种动物细胞裂解液兼容。
5. 使用简单，在细胞裂解液中按一定比例加入即可(根据蛋白*(代"磷")酸酶决定，一般按1/100的体积比)。
6.适用于Western blot、免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定和信号传导等试验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在临用前溶解本产品，并按1/100的比例加入到细胞裂解液中(1mL细胞裂解液中加入10μL)。注意：对蛋白*(代"磷")酸酶含量特别丰富的组织，可以将加入比列提高到1/20-1/50。
2.后续动物细胞提取和蛋白组学处理按常规方法进行即可。

注意：避免反复冻融本产品，所以第一次溶化后，如果还有剩余，可将其分装成小份冻存，每次用多少取多少。

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