北京现货BTN90603A型随机引物法DNA探针标记试剂盒优

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名称：随机引物法DNA探针标记试剂盒
编号：BTN90603A
产地：国产|进口
英文名：Random Primer DNA Labeling Kit
规格：5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。
关键词：BTN90603A,Random Primer DNA Labeling Kit,随机引物法DNA探针标记试剂盒


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编号	名称
BTN130823	多点突变试剂盒
BTN3100	RNA长效保存液
BTN160684-25A	SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒
BTN120653C	填入法DNA末端标记试剂盒(地高*(代"辛")标记dUTP)
BTN120310	T7 RNA聚合酶
BTN120654A	Southern专用DNA Marker(生物素标记)
BTN130871	一站式MBP标签蛋白纯化套装
BTN100405	20×SSC溶液
BTN131279	戊二醛二甲砷*(代"酸")*缓冲固定液
BTN130537	*蛋白酶抑制剂Ⅰ溶液(10mg/mL)
BTN130911	miRNA cDNA第一链合成试剂盒
BTN131278	戊二醛磷酸缓冲固定液
BTN140383	农杆菌EHA105化学感受态细胞
BTN130844	柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒
BTN60201	非酶DNA清除剂(＞200nt)
BTN130994	96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
BTN101002	KOD DNA聚合酶
BTN121112	大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞
BTN130883	磷酸化蛋白纯化试剂盒
BTN130828	DNA去磷酸化试剂盒
BTN90602C	DNA marker(pUC19/MspI)
BTN120412	微球菌核酸酶
BTN90407C	cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
BTN51104	B载体
BTN80905	大提柱式细菌RNA提取试剂盒
BTN130665	Cre重组酶
BTN140388	酿酒酵母NMY51感受态细胞
BTN130983	RNase喷雾清除剂
BTN140436	非蛋白型Western封堵液
BTN120654F	Southern DNA Marker Oligo(DIG标记)
BTN60106	平末端DNA加T试剂盒
BTN131005	cDNA第二链合成试剂盒
BTN101102	改良Lowry法蛋白定量试剂盒