动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)北京现货促销

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)北京现货促销，产品信息：

类别：RNA纯化

英文名：Animal RNA column extraction kit(Trizol)

产品名	产品编号	包装规格
动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)	BTN71201	50次

英文名：Animal RNA column extraction kit(Trizol)

产地：国产|进口

品牌：百奥莱博

编号：BTN71201

规格：50次

本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

 

试剂盒特点：

1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。

2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。

3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。

4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。

5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。

6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。

 

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

 

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

 

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：

a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。

b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。

c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。

d)对RNAhold 保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。

2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。

3. 12000rpm室温离心3～5分钟。

4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。

5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。

6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。

7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。

8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。

9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。

10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。

11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。

12.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

13. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA 最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。

14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。

15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。

16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

 

疑难解答：

Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？

A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。

Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？

A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)北京现货促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
BTN60204	RNA纯化	非酶多糖清除剂(RNA样品专用)
BTN131181	核酸扩增(PCR)	EDTA溶液
BTN60308	其他生化试剂	EDTA溶液(RNase-Free)(0.5M,pH8.0)
BTN130401	DNA纯化	海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)
BTN120504	RNA纯化	柱式藻类RNA大量提取试剂盒
BTN81220	RNA纯化	昆虫RNA柱式提取试剂盒
BTN160802	核酸电泳及回收	丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(49.5%T,3%C)
BTN80103	RNA纯化	柱式细菌RNA提取试剂盒
BTN81212C	蛋白质研究	一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)
BTN100209	工具酶	大片段Bst DNA聚合酶
BTN17-0270	工具酶	限制性内切酶SpeI(BcuI)
BTN120410	工具酶	核酸外切酶I
BTN131183	工具酶	链激酶
BTN71203	RNA纯化	植物RNA柱式提取试剂盒
BTN101121	RNA纯化	软骨RNA柱式提取试剂盒
BTN81207	蛋白质研究	半干法电转液(干粉)
BTN120517	其他培养基	零诱导培养基
BTN80935	核酸电泳及回收	剥离硅烷
BTN100841	蛋白质研究	电泳级β-巯基乙醇
BTN3160	工具酶	RNase A溶液(10mg/mL)
BTN100805B	RNA纯化	Tris饱和酚-*仿-异戊醇混合液(DNA提取用)
BTN100602	干粉培养基	LB培养基
BTN160906	RNA纯化	植物RNA提取试剂盒(无酚无*仿柱式提取)
BTN131139	核酸扩增(PCR)	Deaza dGTP溶液(5mM)
BTN111116B	蛋白质研究	一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)
BTN140410	其他细胞生物学试剂	Flemming固定液
BTN90903	RNA纯化	无RNase的DNase溶液

 

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