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上海禾午生物科技有限公司
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文献和实验水溶解后,在底物缓冲液中密闭、低温(2~8℃)可稳定1年。 3.3.2 AP的底物 AP为磷酸酯酶,一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作为底物,可制成片剂,使用方便。产物为黄色的对硝基酚,在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后,黄色可稳定一时间。 AP也有发荧光底物(磷酸4-甲基伞酮),可用于ELISA作荧光测定,敏感度较高于用显色底物的比色法。 3.4 洗涤液 在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸
溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上.2.包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白
酶联免疫吸附(ELISA)可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位;(2)研究抗酶抗体的合成;(3)显现微量的免疫沉淀反应;(4)定量检测体液中抗原或抗体成份。实验原理双抗体夹心法(常用于测定抗原)用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。实验步骤一、材料准备1. 实验材料:血清、血浆、体液
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