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- 2025年10月31日
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报告基因相关
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上海三抒生物科技有限公司
- 规格：
100次
三抒生物生产的海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一种以肠腔素(Coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla reniformis luciferase，简称renilla luciferase)活性的试剂盒。
海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化Coelenterazine氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。
通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。海肾萤光素酶一方面常用作萤火虫萤光素酶报告基因检测的内参，以消除由于质粒的转染效率不同而带来的误差；另一方面海肾萤光素酶也可以和萤火虫萤光素酶一样被用于常规的报告基因检测。
海肾萤光素酶催化Coelenterazine发光的最强发光波长为465nm (centered around 465nm)。
本试剂盒可以测定100个样品。
保存条件：
报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效，-20℃保存一年有效；萤光素酶检测试剂-20℃避光保存6个月有效，-80℃避光保存一年有效。
注意事项：
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数） woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶，底物因荧光素酶的类型而不同（如荧光素）。 常用荧光素酶信息表： 其中最有代表性的是来自萤火虫体内（Firefly）和海肾（Renilla）体内的两类萤光素酶，分别命名为萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（GLuc）。 萤火虫荧光素酶（FLuc）作为最通用和最常见的报告基因，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性，可用于原核和真核细胞。FLuc
、RNA剪接研究。 萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光
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