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- omiget
- Omt-05
- 北京
- 2025年10月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 保质期：
12个月
- 供应商：
科邦兴业（北京）科技有限公司
- 保存条件：
-20 ℃保存
- 规格：
0.2ml
产品简介
海肾萤光素酶（Renilla Luciferase）是一种分子量为 36 kD 的蛋白， 最初从腔肠动物海肾(Renilla
Reniformis)中分离鉴定出来.，在氧气存在的情况下可以将腔肠素（Coelenterazine）氧化成腔肠酰胺
（ Coelenteramide ），并发出生物萤光。检测萤光的强度，即可确定海肾萤光素酶的表达水平。可以
将目的基因的转录调控元件或启动子区域 DNA 序列克隆到海肾萤光素酶基因的上游，或将目的基因
的 3’-UTR 区域 DNA 序列整合到海肾萤光素酶表达基因的下游，通过测定海肾萤光素酶活性的变化
来鉴定目的基因在转录水平的表达变化。此外，海肾萤光素酶通常与萤火虫萤光素酶共同表达在一
个细胞内，充作萤火虫萤光素酶活性检测的内参。
特点与优势
1. 本试剂灵敏度高于市售同类试剂，可以更有效的检测海肾萤光素酶活性。
2. 本试剂盒操作简单，能够快速完成海肾萤光素酶活性检测。
使用说明
1. 以 6 孔细胞培养板培养的贴壁细胞为处理对象，实验步骤如下：
2. 细胞转染。细胞转染实验请参考本公司转染试剂（Omifection ，Cat ：Omc-01）说明书中的实
验步骤，将编码海肾萤光素酶基因的质粒转入 6 孔板的细胞中，2 μg/孔。
3. 细胞裂解液配制。将 5×细胞裂解液与 ddH 2 O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×细胞裂解液。现
用现配，剩余的细胞裂解液可在 4℃保存一周。
4. 细胞裂解。细胞转染 48 h，弃培养液，预冷的 PBS 洗涤细胞 1 次，加入 1 ml 细胞裂解液（1×），
置于 4 ℃冰箱中的摇床上，摇晃 15-30 min，裂解细胞。裂解液转入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，
4 ℃离心 5 min，上清转移至新的 EP 管中，作为待测样品。
5. 海肾萤光素酶检测试剂配制。每个样品需要 100 μl 检测试剂。根据样品数量，计算所需海肾萤
光素酶检测试剂体积，按照底物：稀释液=1:50 的比例稀释底物，制备海肾萤光素酶检测试剂。
6. 活性测定。打开检测仪器，设置测定参数，一般延迟时间（整合时间）为 2 sec，测定时间为 10-20
sec。吸取 100 μl 海肾萤光素酶检测试剂，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待测样
品（细胞裂解液），混匀，仪器检测。
注意事项
1. 酶促反应受温度影响，待测样品和试剂应达到室温后再进行检测。
2. 海肾萤光素酶的底物腔肠素是乙醇溶液，易挥发。收到产品时若发现其体积小于0.2 ml，可自行
添加适当的无水乙醇补齐体积为0.2 ml。
3. 配制的海肾萤光素酶检测试剂，若不立即使用，可置于-20 ℃保存1周， -80 ℃保存一个月。
4. 手动测定时，样品加入底物时的间隔时间和混合次数尽量一致，减少操作误差。
5. 若与萤火虫萤光素酶配套形成双萤光素酶检测系统，请使用具有灭活萤火虫萤光素酶活性的特
定海肾萤光素酶底物稀释液（双萤光素酶报告基因检测试剂盒中提供，SFAR稀释液）。
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文献和实验janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数） woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶，底物因荧光素酶的类型而不同（如荧光素）。 常用荧光素酶信息表： 其中最有代表性的是来自萤火虫体内（Firefly）和海肾（Renilla）体内的两类萤光素酶，分别命名为萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（GLuc）。 萤火虫荧光素酶（FLuc）作为最通用和最常见的报告基因，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性，可用于原核和真核细胞。FLuc
Chromosome Conformation Capture (3C) (PROT05)
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