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文献和实验Ficoll密度梯度离心法提取PBMC原理及注意事项 外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。PBMC 可利用健康人或动物供体的外周血,通过 Ficoll 密度梯度离心,磁珠分选等步骤获得,主要包括淋巴细胞和单核细胞。 Ficoll 是蔗糖的多聚体,中性,平均分子量 400,000,当密度为 1.2
处理抗原的机制以及引起DC迁移和成熟的信号传导等领域研究的深入,有关人DC大量培养和扩增的方法日益成熟。目前,树突状细胞有三个来源:骨髓、外周血和新生儿脐带血。从骨髓中分离获得树突状细胞的CD+34的祖系细胞,或从外周血或新生儿脐带血于体外经14d培养分化(在GMCSF和TNFa存在的情况下)成为成熟的CD+1a、CD+83、HLADR的树突状细胞;或者用外周血纯化的CD+14单核细胞或粘附单核细胞在二种细胞因子(GMCSF和IL4或IL13)的培养刺激下成为CD+1a、CD+83的未成熟树突状细胞
,如体外增殖数量少、需输注IL-2、低效及副作用大等,现已经成为肿瘤生物治疗的一种新方法。 树突状细胞(DC)是机体内最重要的、功能最强的抗原呈递细胞(APC),最初是Steinman和Cohn等于1973年从小鼠脾组织中分离发现的。DC最大的特点是能激活初始型T细胞增殖并建立初级免疫应答;DC 激发T细胞增殖及抗原呈递能力是巨噬细胞和B细胞的100-1 000倍。以外周血单核细胞为DC前体细胞诱导DC,是体外大量生成DC的一条重要途径。GM-CSF可促进髓系
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