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大量
- 细胞类型:
正常细胞/癌细胞
- 组织来源:
详询
- 相关疾病:
详询客服人员
- 物种来源:
大鼠
- 细胞形态:
上皮细胞样
- 器官来源:
详询
- 运输方式:
常温运输
- 年限:
长期保持
- 生长状态:
良好
细胞名称:WB-F344 大鼠肝上皮样干细胞
组织来源:肝
培养条件:DMEM +10% FBS
形 态:贴壁;上皮细胞样
购买细胞注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通交流。
贴壁细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5-6ml完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
悬浮细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数细胞培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验最近师妹开始做 WB 实验了,但是一天又一天重复做,却次次结果不理想。除了没有拿到组会可以汇报的条带外,师妹集齐了所有奇奇怪怪的条带:微笑带,皱眉带,拖尾带,甚至没有条带…… 师妹也因此对我发出了灵魂拷问:「为什么 WB 实验这么容易翻车?」 虽然 WB 是一类基础实验,但是基础并不代表简单。翻车的主要原因在于 WB 的步骤实在繁琐:从配置蛋白胶开始,到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育,一整套流程下来花费 1~2 天的时间才能进行最后的显影。这些环节中但凡有一个出错,就会导致实验
「救命!做 WB 蛋白样品提取时,样品加入裂解液,离心后发现管里有很多的胶状物,非常粘稠,有点像鼻涕!多加裂解液稀释一下仍然没有效果,蛋白浓度还变得很低。不死心的我把它戳出来玩了一会,戳戳戳仍然是一大团,这粘稠物是什么?对我的后续实验会有什么影响?」 当你看到这团粘稠的「鼻涕」,就意味着你即将经历下面五个难题的考验: 1. 样品吸液困难 堵塞移液器:离心后吸上清液的时候胶状物会堵塞移液器头,移液后上清液所剩无几。 无法分离上清液:样品太
毛毛虫0118 我想用人血标本做WB,请问血标本最多可以放多久啊?还有做WB的话,要收集大概多少毫升血就可以了呢? 毛毛虫0118 为什么没有人回复我啊? volano 建议你还是自己摸索一个量 首先,不知道你要做的目的蛋白是什么?分子量有多大?是不是容易降解? 如果分子量大,不容易降解,那可以储存比较长时间,如果你的目的蛋白是小蛋白那就是越新鲜越好吧,我看过师姐做的12KD
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