北京全蛋白提取试剂盒(中)价格

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名称：北京全蛋白提取试剂盒(中)价格
编号：QN1068
产地：国产|进口
规格：50T|100T
全蛋白提取试剂盒(中)用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。

操作方法:
1、组织总蛋白的提取
(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀，放置在冰上备用;
(2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5～1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作;
(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
(1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml;
(2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min
(3)悬浮细胞：4℃,400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3～4次;
(4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min;
(5)将上清移入新的EP管中;
(6)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

注意事项：
1、实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境;
2、PSMF(有毒)现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解;

储存条件 ：-20℃

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·热启动Taq DNA Polymerase
编号：QN0871
英文名称：Hot Start Taq DNA Polymerase
规格：500U|1000U
Hot Start Taq DNA Polymerase品是抗Taq单克隆抗体修饰的热启动Taq DNA Polymerase，高温加热前抗Taq单克隆抗体与 Taq酶结合，抑制聚合酶的活性，从而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤已变性，因此无需特殊失活处理，在常规PCR反应条件下即可使用。在qPCR反应中，能明显提高荧光PCR的扩增效率(尤其对低拷贝数模板)，改善其扩增曲线的完美度，其稳定性好、可重复性高、特异性强。此酶室温放置一周，酶活性仍可保持95%以上。

活性定义：1单位(U) Taq DNA Polymerase活力定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：SDS-PAGE检测Taq DNA Polymerase纯度大于99%;经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因;室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：20mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mM EDTA;1 mM DTT;100 mM KCl;50% glycerol;稳定剂

适用范围：用于小于6kb的对保真度要求不高的DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于T/A载体克隆。

建议PCR条件：预变性温度是95度，时间为5-10分钟，其它的和普通Taq酶的反应条件一样。

PCR体系(以50μl反应体系为例)

Template———————————＜0.5μg
上游引物(10μM)————————1μl
下游引物(10μM)————————1μl
10×Buffer(含Mg2+)——————5μl
dNTP(各2.5mM)—————————4μl
热启动Taq酶——————————0.5-1μl
ddH2O—————————————up to 50μl

储存条件：-20℃保存, 有效期至少一年


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