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- 详细信息
- 文献和实验
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- 保存条件:
阴凉干燥
- 保质期:
1年
- 库存:
621
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应1kb plus DNA ladder(300~10000bp) 核酸电泳和回收,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:1kb plus DNA ladder(300~10000bp) 核酸电泳和回收
产地:国产|进口
编号:RFT004
品牌:百奥莱博
规格:100T(2×250μl)
本产品是由12条带状双链DNA条带组成的DNA Ladder,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。12条带包括300,500,800,1000,1500,2000,3000,4000,5000,6000,8000,10000bp。其中2000bp条带含量为100ng/5μl,其余条带浓度含量为50ng/5μl。
使用方法:
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中进行电泳。
注:根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl;窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl;宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子,可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件:凝胶浓度为1.0%,凝胶长度8-10cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间35-40分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注意事项:
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
储存条件:-20℃,有效期1年。
关于1kb plus DNA ladder(300~10000bp) 核酸电泳和回收的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
9005-79-2 糖元Ⅱ Glycogen fromoyster TypeⅡ
9003-98-9 (Dnase Ⅰ)DeoxyribonueleaseⅠ
ARB12495 大鼠神经肽Y(NP-Y)代做ELISA实验 Rat neuroPeptide y,np-y ELISA KIT
BL0801 猴IgG抗原(液体)
ARB11330 人胞浆免疫球蛋白(CIg)血清中含量检测 Human cytoplasmic immunoglobulin,cig ELISA KIT
BL1053 MRS肉汤
BTN60101 Ampicillin Powder
ARB10022 人5核苷酸酶(5-NT)ELISA代测服务 Human 5-nucleotidase,5-nt ELISA KIT
甘*酸* Berberine hydrochloride 14783-68-7
BL0923 RBITC标记羊抗人纤维蛋白原抗体
NF-210 羊抗人C4血清
M0104 化学发光底物
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·Western一抗稀释液
编号:RFT089
英文名称:Primary Antibody Dilution Buffer
规格:100ml
本品可以用于Western时一抗的稀释和配制。使用本Western一抗稀释液稀释和配制的一抗可以在4℃保存和使用不少于六个月,可以反复多次用于Western,节约您宝贵的抗体。按照每个一抗稀释10毫升计算,一个包装的Western一抗稀释液可以稀释10个或10次一抗。
使用方法:
参考所用的一抗的说明,以及样品中目的蛋白的含量,按照适当比例例如1:1000、1:500等比例稀释一抗。一抗稀释后即可直接用于Western。一次Western结束后,可以回收稀释的一抗,4℃保存,以用于下次的Western。
注意事项:为了能使抗体可以反复多次使用,建议尽量在4℃进行一抗和蛋白膜的结合反应,以减缓一抗的衰减速度。
储存条件:4℃,有效期12个月。
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·RNA提取试剂
编号:RFT034
英文名称:RNA Extraction Reagent
规格:100ml
本试剂是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂,可以提取细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总RNA。提取的总RNA可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保护分析等分子生物学实验。
产品特点:
1 分相明显:本试剂为粉红色,便于*仿分相后区分水相和有机相。
2 结果可靠:该试剂含有强烈抑制RNase活性的物质,可靠保护RNA不降解。
3 价廉物美:其提取效果与国外进口产品相媲美,价格却低于它的三分之一。
自备试剂及耗材:
*仿、异丙醇、75%乙醇(用RNase-free 水配制)、RNase-free的水、RNase-free的耗材(Tip头,离心管等)。
操作步骤:
1、匀浆处理
组织中提取总RNA:
a.植物组织:植物叶片直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100mg植物叶片加入1ml RNA 提取试剂。
b.动物组织:按10-30mg组织加入1ml RNA 提取试剂,用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。
培养细胞中提取总RNA:
a.贴壁细胞:无须胰酶消化,可直接用RNA 提取试剂进行裂解,每10cm2培养面积加1mlRNA 提取试剂。
b.悬浮细胞:可直接离心收集、裂解,每1ml RNA 提取试剂可裂解5×106动物或酵母细胞,或107细菌细胞。
血液中提取总RNA:
直接取新鲜的血液,加入3 倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,9,000 g离心1分钟。彻底吸弃上清,收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml RNA提取试剂。
2、分层(Phase Separation)
根据样品,选择使用方法A或者方法B。如果不确定,则使用方法 B。
A、(细胞,血液,一般动物组织)
室温静置5 分钟,再按照1 ml RNA 提取试剂使用200μl的比例加入*仿,用力颠倒离心管以混匀;室温静置3 -5 分钟使之分层后,4℃ 12000g 离心15
分钟。
B、(植物,脂肪及肝脏等某些杂质含量较高的样品)
室温静置5 分钟后,4℃条件下12000 g 离心10 分钟,将上清移入另外一个离心管中。再按照1 ml RNA提取试剂使用200μl 的比例加入*仿,用力颠倒离心管以混匀。室温静置2 - 5 分钟使之分层后,4℃条件下12000 g 离心15 分钟。
注意:
·4℃ 离心对于降低基因组DNA 的污染是很重要的。
·杂质含量高的样品一定要使用2-B 操作。2-B 操作不仅可以将大部分杂质离心去除,也可以将大片段的基因组
DNA 离心去除,方便加入*仿后的分层,不过,如果想同时抽提总RNA 和基因组DNA,则使用2-A 操作。
·加入*仿后的混匀是非常重要的,否则静止分相易出现分相倒置,即水相在离心管下部而有机相在上部。不推荐振荡混匀,而推荐直接用手混匀:将管底斜向朝上,手斜向快速摇动,使体系成粉色乳状。
3、RNA沉淀(RNA Precipitation)
小心将上层水相(通常可吸取550μl)移至另外一个离心管中,再加入等体积冰冷的异丙醇混匀,室温放置10 - 20 分钟,4℃12000g 离心10min,弃上清,RNA沉淀于管底。
注意:
·中间层和红色下层置于 4℃ 保存,以便接下去抽提基因组DNA。
·用冰冷的异丙醇能更迅速的沉降RNA。
·取上层水相时要特别小心,绝对不要吸入白色中间层及红色下层。移取水相时要使用小体积移液器:200μl 移液器,Tip 的尖嘴要贴在管壁,慢慢松手吸出液体。
·对于脂肪类组织,包括脑组织,在上清的最上层为脂肪,取上清时不要吸入,必要时用等体积*仿对上清再抽提一次。
·如果是杂质含量高的样品,强烈建议将此步操作改为:在上清中加入一半体积的异丙醇,混匀后,再加入一半 (指上清) 体积的RNA 沉淀试剂(1.2M NaCl,0.8M 柠檬酸*)。再混匀后,室温放置10 – 20 分钟。
·弃上清后,将离心管置于离心机中离心数秒,再用移液器将残留液体小心吸出。这是最彻底的去除上清的方法,比倒掉上清后再将离心管倒扣在吸水纸上的方·法可靠得多。如果是杂质含量高的样品,强烈建议增加此步操作。如果肉眼看不见沉淀,则不要用移液器吸。
4、RNA漂洗(RNA Wash)
a.RNA 沉淀中加入1ml 75%乙醇(用RNase-free 水配制),温和振荡离心管,悬浮沉淀。每1ml RNA提取试剂加入1ml 75%乙醇。
b.4℃ 7,500 g离心5min,弃上清。
注:转速不要高于7,500g,否则得到的RNA不易溶解。
c.短暂快速离心,用移液器小心吸弃上清,注意不要吸弃沉淀。室温放置1-2分钟晾干沉淀。
注:RNA样品不要过于干燥,否则很难溶解。
5、溶解RNA(Redissolving the RNA)
根据需要,沉淀中加入适量(一般可加50-100μl)RNase-free 水,轻弹管壁,以充分溶解RNA,-70℃保存。
储存条件:2~8℃,避光,有效期12个月。
我公司正在打折促销核酸电泳和回收全系列产品,恭候您的咨询选购1kb plus DNA ladder(300~10000bp) 核酸电泳和回收。
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文献和实验纯化特定大小范围(例如,200-300bp)的 DNA 片段,以不仅去除低分子量和高分子量片段,而且还去除衔接子,酶 以及来自前面步骤的试剂。片段筛选有助于确保输入样品具有长度均一的片段,从而实现具有高品质和一致性的测序[1]。凝胶电泳是尺寸选择的一种方法,因为在窄范围(图 8 )中选择特定尺寸片段的效率高。 图 8.片段筛选前后的片段大小分布 b. 凝胶纯化概述 制备型电泳是从凝胶中分离和纯化核酸的关键步骤。核酸纯化通常先从凝胶基质上切割目标样品条带,然后再提取核酸。在进行凝胶纯化时,应注意
;还有一个原因是你设置的电压太高,最好是2~4v/cm,跑4~6小时比较合适(2)“我是按说明书上0。8%的琼脂糖”:凝胶浓度太低了,把凝胶浓度加大到2%,放心做,没问题的(3)“说明书上说混合温和”:那是怕你混匀太剧烈导致细胞基因组DNA断裂啊,注意很轻轻的混匀(4)“收集凋亡细胞时离心时转速”:我在实验室中是5000rpm,离心5min,我觉得足已mmyycc :我的ladder总是只有一条带,与对照组差别不大,用的是100v,1-1.5h,不知道是不是这个原因?溴酚兰跑到什么位置合适
染料。 (2) 按照常规方法进行电泳即可。 u 注:此方法染色可以准确确定片段分子量,用量相对较少。1mL染料大约可以做300块100mL的胶。 2.点染法 (见图3) (1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。 (2) 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SUPER Green Ⅰ稀释100倍,即为SUPER Green Ⅰ工作液。SUPER Green Ⅰ工作液可以置2~8℃保存一个月以上。 (3) 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料
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