动物组织细胞DNA提取试剂盒现货价格

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括动物组织细胞DNA提取试剂盒现货价格在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：动物组织细胞DNA提取试剂盒现货价格
英文名：Animal tissue cell DNA Extraction Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：RFT035
规格：50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，能提取多种细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

提取效率：
动物细胞培养液(样本量10^6～10^7)：5～30 μg
动物组织(样本量30mg)：10～30μg

试剂盒组分;

 

组份	50次	100次	贮存方式
缓冲液GA	15 ml	30 ml	室温
缓冲液GB	15 ml	30 ml	室温
去蛋白液GD(浓缩液)	18 ml	36 ml	室温
漂洗液PW(浓缩液)	25 ml	25ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15 ml	室温
蛋白酶K(20 mg/ml)	1ml	2×1ml	-20℃
RNase A(10 mg/ml)	0.5 ml	1 ml	-20℃
吸附柱CG	50个	100个	室温
收集管(2 ml)	50个	100个	室温
说明书	1份	1份

准备工作：
1. 准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2. 按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、处理材料：
a. 培养细胞：贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(如用PBS缓冲液或类似缓冲液)，10,000 g离心1分钟，倒尽上清，加入200μl缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
b. 组织：取约30mg动物组织(脾组织用量应少于10 mg)加入到事先盛有200μl 缓冲液GA的1.5ml离心管中，用研磨杵彻底将组织研碎。
2、加入20μl蛋白酶K (20 mg/ml)溶液。
a. 提取细胞基因组时，加入蛋白酶K混匀后，55℃放置5-10分钟。
b. 提取组织基因组时，加入蛋白酶K混匀后，在55℃放置，直至组织溶解。
注：不同组织裂解时间不同，通常需1-3小时即可完成(鼠尾需要消化过夜),期间间歇颠倒混匀样品。
3、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
4、加入220μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置一段时间后会消失。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，会影响DNA的纯度和得率，而且可能导致步骤6中离心柱堵塞。
5、加入220μl 无水乙醇，颠倒混匀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤6中离心柱的堵塞。
6、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱CG放回收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到5分钟。
7、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
8、向吸附柱CG中加入700μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
9、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000g离心1分钟，倒掉废液。
10、将吸附柱CG放回废液收集管中，11000g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
11、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11000g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于100μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
12、DNA产物-20℃保存。

储存条件：室温，有效期12个月。

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·2×GC Buffer
编号：RFT091
规格：1ml|5×1ml|10×1ml
本品用于PCR扩增复杂结构的DNA片段。本品能与各种PCR酶配合使用，能够扩增具有复杂二级结构模板(GC rich、重复序列等)的PCR片段。使用 GC Buffer 进行PCR扩增时，建议使用 Tm 值较高的引物。因此，引物最好设计在30 mer左右。使用GC Buffer扩增的GC rich 的DNA片段长度，会因GC含量不同而各有差异。由于GC Buffer和一般的PCR Buffer相比DNA变性效果较强，因此，一般的 DNA片段(GC含量低于50%的目的片段)不推荐使用2×GC buffer进行扩增。

储存条件：-20℃

·BCIP/NBT即用型显色液
编号：RFT082
英文名称：BCIP/NBT Solution，Premixed
规格：100ml
本染色液为即用型工作液，可以直接使用，不用稀释。BCIP＋NBT是碱性磷酸酶(AP)最佳的底物组合之一。在碱性磷酸酶的催化下，BCIP会被水解而产生强反应性的产物，该产物与NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色化合物。该试剂盒可用于AP系统的IHC 和Western Blot 实验的酶促显色。在AP催化下，在组织切片或印迹膜上结合了AP偶联物的地方产生深蓝色沉淀，可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。

使用方法：
1. 印迹膜显色：
将本产品滴加在待检测的印迹膜上(或将印迹膜浸入到 BCIP/NBT 显色液中)，室温避光孵育 10-20 分钟。显色完毕后，将膜浸入水中，终止反应。
注：印迹膜显色前要用1×TBST漂洗3次，每次10分钟。不要用1×PBST漂洗，因为无机磷是AP的强烈抑制剂。

2. 组织切片或细胞爬片显色：
滴加适量的BCIP/NBT显色液于需要显色的组织切片或细胞爬片上，室温避光孵育10-20分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到最佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。

储存条件：2～8℃，有效期一年。


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·PCR产物纯化试剂盒
编号：RFT031
英文名称：PCR product purification kit
规格：100次|200次
本试剂盒采用离心吸附柱结合独特的缓冲液系统，从酶切、PCR等反应溶液中纯化DNA片段，同时除去蛋白质、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒可回收100bp–10kb的DNA片段，回收率大于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率为30－50%)。每个吸附柱每次最多可吸附的DNA量约为10μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

试剂盒特点：
1、结合液PB为亮黄色，便于观察体系的pH是否合适。
2、操作快捷，单个样品操作少于10分钟。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、在PCR反应液中直接加入5倍体积的PB液，颠倒混匀后，全部加入到吸附柱CA2中，10000g离心30-60秒，到掉收集管中的废液，将吸附柱CA2重新放入收集管中。
注意：
a.如果PCR反应体系使用了石蜡油，无需去除，但要使用10倍体积的PB液。
b.如果反应体系小于50μl，用水补至50μl体系，再加入PB液。
c.如果体系体积大于700μl，请分次上柱，保证全部溶液均加入到吸附柱中。
2、向吸附柱CA2中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，10000g离心30-60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。
3、向吸附柱CA2中加入500μl漂洗液PW，10000g离心30-60秒，倒掉废液。
4、将离心吸附柱CA2放回收集管中，10000g离心2分钟，尽量除去漂洗液。
注意：此步必不可少！如果漂洗液有残留，将会影响回收效率和DNA质量，进而影响下游实验；离心后将吸附柱盖子打开，室温放置2分钟，这样将有助于彻底挥发残余乙醇。
5、将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟。10000g离心2分钟收集DNA溶液。
注意：
a.可将洗脱缓冲液EB预热到60-70℃后再加到吸附膜上，这样可以提高洗脱效率。
b.CA2柱的洗脱体积不应少于20μl，体积过小将会降低回收效率。
c.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率
6、DNA产物-20℃保存。

储存条件：室温，有效期12个月。


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·高纯度质粒提取试剂盒
编号：RFT028
英文名称：High purity Plasmid Extraction Kit
规格：100次|200次
本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性，可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而，对质粒纯度要求更高的转染实验(要求无内毒素)，此试剂盒不能达到要求。另外，尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒(>10kb)，但我们不推荐使用。如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量(使用5–10 ml过夜培养物)，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量；洗脱缓冲液应在70℃预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。

本试剂盒使用了有颜裂解液，菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验，所以我们增加了有颜裂解液(一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂)来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后，有颜裂解液使菌液变为浑浊的红色；加入P2后，有颜裂解液立即使溶液变为澄清的红色，裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清，如果红色非常均一，表明裂解充分；在完全裂解的体系中加入P3混匀后，体系立即变为黄色，任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。

本试剂盒增加了去蛋白液PD，能更加彻底地去除蛋白污染，得到纯度更高的质粒。

试剂盒组分：

试剂盒组成	100次	200次	贮存方式
RNase A	300μl	600μl	-20℃
有颜裂解液	600μl	2×600μl	室温
溶液P1	30 ml	60 ml	室温(加入RNase A后2-8℃保存)
溶液P2	30 ml	60 ml	室温
溶液P3	40 ml	80 ml	室温
去蛋白液PD	60 ml	120 ml	室温
漂洗液PW	25 ml	2×25 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15 ml	室温
质粒吸附柱CP	100个	2×100个	室温
收集管(2 ml)	100个	2×100个	室温
说明书	1份	1份

储存条件：室温，有效期12个月。

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