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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-80℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
JM109 Competent cell
- 库存:
442
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货JM109化学感受态细胞打折促销的品牌:百奥莱博,是优质的克隆与表达产品,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多JM109化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货JM109化学感受态细胞打折促销
产地:国产|进口
编号:RFT113
品牌:百奥莱博
规格:20×100μl
本公司生产的JM109感受态细胞采用经特殊工艺处理得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测,转化效率可达108cfu/μg,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
基因型:endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]
特点:用于蓝白斑筛选;recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12—16小时。
注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
注意事项:
1、感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
储存条件:-70℃,有效期6个月。
欲咨询购买北京现货JM109化学感受态细胞打折促销,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
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北京现货JM109化学感受态细胞打折促销关键词:JM109 Competent cell,JM109化学感受态细胞,RFT113
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北京现货JM109化学感受态细胞打折促销关键词:JM109 Competent cell,JM109化学感受态细胞,RFT113
·利福平溶液(50mg/ml)
编号:RFT182
英文名称:Rifampicin Solution
规格:5×1ml
利福平对革兰氏阳性菌具有高抗性,如葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等,单对于革兰氏阴性菌的抗性不强。
CAS号:13292-46-1
分子式:C43H58N4O12
分子量:822.94
储存条件:-20℃,有效期12个月
·双色预染宽分子量蛋白质Marker(10~170kD)
编号:RFT052
英文名称:Dual Color Prestained Broad Molecμlar Weight Protein Marker
规格:20T(100μl)
本产品包含10种纯化的预染蛋白质组成,分子量范围为10kD-170kD,其中70kD条带为红色,10kD条带为绿色,其余条带为蓝色,可以用于SDS-PAGE和Western Blot转膜时确定未知蛋白的分子量。
使用方法:
1、第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用。
2、-20℃取一管样品,彻底融化,上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl,其他规格梳子请适当调整上样量。
3、电泳结束后,可以直接在胶上观察结果。
4、预染蛋白Marker在不同的凝胶系统中迁移率会有不同,因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小,请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
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文献和实验。这个过程似乎要稍微麻烦一些,而且对感受态细胞还有要求,一定要表达Cre重组酶。我们常用的TOP10、JM109等就不能用了。不过它胜在价格便宜,20次的价格为4084元,还经常打折。 不花钱购买新载体,也一样能实现5分钟的克隆。NEB公司的快速连接试剂盒就不可小觑。它其中的T4连接酶浓度竟然高达2000 U/ul,是其他厂家的400倍。因此连接效率也陡然上了一个新台阶,从原先的过夜孵育缩短到5分钟。使用的时候一定要注意了,不要觉得时间太短,自作主张延长一会儿,其实根据NEB专家的研究,延长
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