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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
一年
- 英文名:
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
- 库存:
535
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖北京细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒厂商在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
规格:50T
编号:SY0326
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
细胞核蛋白、细胞浆蛋白在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义,因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离。本试剂盒提供了一种较为简单方便,高效的蛋白抽提方法,其原理是:通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂C抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒1次可对2×106个细胞和30-50mg组织样品进行抽提,按照该使用量,SY0326可抽提50个样品。
产品组份:
胞浆蛋白抽提试剂A————10ml
胞浆蛋白抽提试剂B————0.5ml
胞核蛋白抽提试剂————2.5ml
储存条件:-20℃,有效期一年。
使用方法
将试剂盒各组分溶解后立即放置在冰上,混匀。取适量的胞浆蛋白抽提试剂A(以下统称:试剂A)和胞核蛋白抽提试剂(以下统称:试剂C)备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
1 细胞样品蛋白的抽提
1)细胞处理
对于贴壁细胞:PBS清洗细胞1次,EDTA溶液消化细胞或用细胞刮子刮下细胞,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
【注】:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解抽提的目的蛋白。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,PBS清洗细胞1次,收集细胞,尽量吸尽上清,留细胞沉淀备用。
2) 每20µl细胞沉淀加入200µl含PMSF的试剂A。
【注】:对于2×106个Hela细胞,其细胞沉淀的体积大约为20µl或40mg。
3) 最高速剧烈涡旋5s,完全悬浮分散细胞沉淀。
【注】:如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长旋涡震荡的时间。
4) 冰浴10-15min。
5) 加入胞浆蛋白抽提试剂B(以下统称:试剂B) 10µl。最高速剧烈涡旋5s,冰浴1min。
6) 最高速剧涡旋5s,4℃12,000-16,000g离心5min。
7) 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用,也可以冻存备用。
【注】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免吸到沉淀。
8) 对于沉淀,完全吸尽残余上清,加入50µl含PMSF的试剂C。
【注】:此步需完全吸尽上清,否则会带来细胞浆蛋白的污染。
9) 最高速剧烈涡旋15-30s,把沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中,每隔1-2min再高速剧烈涡旋15-30s,共30min。10)4℃ 12,000-16,000g离心10min。
11)立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用,也可以-70℃冻存备用。
2 组织样品的抽提
1) 将组织切成非常细小的碎片。根据后续使用量按照20:1的比例混合试剂A和B,并加入PMSF至最终浓度为1mM,混匀即可配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液,并在玻璃匀浆器内充分匀浆。
【注】:匀浆需在冰浴或4℃进行。
2) 匀浆后将匀浆液转移至塑料离心管内,冰浴放置15min。
3) 4℃ 1,500g离心5min。把上清转移至一预冷的塑料管中,上清含部分细胞浆蛋白。
【注】:吸上清时千万不要触及沉淀。
4) 对于上述收集得到的沉淀,已经充分匀浆,但很多细胞仍没有破碎。接下来请参照【细胞样品蛋白抽提】的步骤2)开始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,即可得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤【组织样品抽提】中步骤3)抽提得到的细胞浆蛋白合并备用。
关键词:SY0326,Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit,细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
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| 编号 | 名称 |
| SY0595 | 一氧化*(代"氮")检测探针 |
| SY0168 | LXR-GFP报告基因质粒 |
| SY0405 | 3ml重力层析空柱 |
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| SY0609 | 乙酰丁香酮 |
| SY0342 | 30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,19:1 |
| SY0617 | 反玉米素 |
| SY0639 | 兔抗β-Tubulin多克隆抗体 |
| SY0021 | 多点突变试剂盒 |
| SY0548 | 支原体去除试剂(2000×) |
| SY0434 | Anti-V5标签亲和纯化凝胶 |
| SY0467 | 碱性磷酸酶活性检测试剂盒 |
| SY0054 | 尿苷三磷酸溶液(100 mM)(UTP) |
| SY0492 | 碘化丙啶(PI) |
| SY0116 | AFP1-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
| SY0052 | 腺苷三磷酸溶液(100 mM)(ATP) |
| SY0503 | 阿尔玛蓝 |
| SY0622 | 激动素 |
| SY0370 | 8%-16%梯度预制胶,12孔 |
| SY0692 | R-藻红蛋白标记山羊抗小鼠IgG(H+L)F(ab)2片段 |
| SY0491 | 碘化丙啶染液(1mg/ml) |
| SY0563 | Hoechst 33342 染液(1mg/ml) |
| SY0412 | 27mm透析袋(透析分子量7kDa) |
| SY0215 | ERRE-GFP报告基因质粒 |
| SY0602 | Alexa Fluor 488-N-羟基琥珀酰亚胺酯 |
| SY0162 | PR-GFP报告基因质粒 |
| SY0264 | DEPC水(无DNase、RNase ) |
| SY0374 | 12%预制胶,12孔 |
| SY0335 | 胆酸* |
| SY0542 | PCR支原体检测试剂盒 |
| SY0037 | 即用型PCR预混溶液 |
| SY0634 | HRP标记小鼠抗β-actin单克隆抗体 |
| SY0653 | 兔抗HA-Tag多克隆抗体 |
| SY0554 | 细胞膜可渗透*离子荧光探针 |
| SY0298 | BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
| SY0471 | 细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI) |
| SY0422 | Flag-tag多肽 |
| SY0514 | 人纤维连接蛋白 |
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文献和实验不需要超速度离心,可以同时处理多个样品。 编号 包装 价格 产地 BSP009 50 Assays 300 生工 细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒 Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 产品说明:本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和胞质蛋白,提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性,并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验
这样一个问题: 某公司的激活-和转运检测试剂盒,监测是否激活NF-KB测试剂盒原理:NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物,分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下,IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化,随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后,其核定位序列被暴露,从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内,就可以判断NF-κB是否被激活.本NF-κB
主要产品 :1.蛋白提取试剂盒I(实体组织和细胞总蛋白提取)2.蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收)3.核-胞浆蛋白制备试剂盒4.变性/非变性细胞裂解产物制备试剂盒5.非变性裂解液6.变性裂解液具体介绍:1.蛋白抽提试剂盒 -I (实体组织和细胞蛋白抽提,100 extractions)P1250 50 次提取 286元100次提取 520元描述:实体组织如大脑富含磷脂、神经纤维或血管壁含大量结缔组织、而脂肪则有大量油脂,常规方法难以有效从这些组织提取蛋白。蛋白抽提试剂盒-I用于
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