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动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书

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      动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书

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      上海一研

    动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书注意事项:
    1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
    2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
    3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
    动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书技术优势
    1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
    2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并最大限度的降低RNA污染。
    3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
    4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
    5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。
    动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书操作步骤:
    1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
    b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
    c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
    2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
    3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
    5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
    6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
    7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
    8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
    9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
    10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
    EHNA (hydrochloride) (25 mg)    (αR,βS)-rel-6-amino-β-hexyl-α-methyl-9H-purine-9-ethanol, monohydrochloride; NSC 263164|erythro-9-(2-Hydroxy-3-nonyl)adenine; EHNA (hydrochloride)
    FIPI (5 mg)    N-[2-[4-(2,3-dihydro-2-oxo-1H-benzimidazol-1-yl)-1-peridinyl]ethyl]-5-fluoro-1H-indole-2-carboxamide; 5-Fluoro-2-Indolyl des-Chlorohalopemide; FIPI
    Alendronate (sodium hydrate) (1 g)    P,P’-(4-amino-1-hydroxybutylidene)bis-phosphonic acid, monosodium salt trihydrate (1:1:3); Fosamax|MK-217|Adronat|G-70465Alendronate (sodium hydrate)
    Misoprostol (free acid) (10 mg)    9-oxo-11。alpha。,16-dihydroxy-16-methyl-prost-13E-en-1-oic acid; Misoprostol (free acid)
    Acivicin (5 mg)    αS-amino-3-chloro-4,5S-dihydro-5-isoxazoleacetic acid; Antibiotic AT 125|NSC 163501|U 42126; Acivicin
    15(R),19(R)-hydroxy Prostaglandin E2 (100 ug)    9-oxo-11。alpha。,15R,19R-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15(R),19(R)-hydroxy PGE2; 15(R),19(R)-hydroxy Prostaglandin E2
    Prostaglandin F2α dimethyl amine (10 mg)    N,N,-dimethyl-9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-amine; Dinoprost dimethyl amine|PGF2α dimethyl amine; Prostaglandin F2α dimethyl amine
    15-cyclohexyl pentanor Prostaglandin F2α (5 mg)    9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-15-cyclohexyl-16,17,18,19,20-pentanor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15-cyclohexyl pentanor PGF2α; 15-cyclohexyl pentanor Prostaglandin F2α
    β-Carotene (50 g)    β,β-carotene; Food Orange 5|KPMK|Lucarotin|NSC 62794|Provatene|Provitamin A|Solatene; β-Carotene
    15-deoxy-Δ12,14-Prostaglandin J2 Glutathione (500 ug)    L-γ-glutamyl-S-[(1S,2R,3E)-2-[(2Z)-6-carboxy-2-hexenyl]-3-(2Z)-2-octenylidene-4-oxocyclopentyl]-L-cysteinyl-glycine; 15-deoxy-Δ12,14-PGJ2 Glutathione; 15-deoxy-Δ12,14-Prostaglandin J2 Glutathione
    Leukotriene F4 (25 ug)    5S-hydroxy-6R-(S-。gamma。-glutamylcysteinyl)-7E,9E,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid; LTF4; Leukotriene F4
    5(R)-HETE (25 ug)    5R-hydroxy-6E,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid; 5(R)-HETE
    9(S)-HODE cholesteryl ester (25 ug)    9S-hydroxy-10E,12Z-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 9(S)-HODE cholesteryl ester
    pNPP Tablets (5 ea)    para-Nitrophenyl Phosphate Tablets; pNPP Tablets
    8-Isoprostane AChE Tracer (100 dtn)    8-epi Prostaglandin F2α|8-iso Prostaglandin F2α; 8-Isoprostane AChE Tracer
    Cyclic AMP EIA Antiserum (500 dtn)    cAMP EIA Antiserum; Cyclic AMP EIA Antiserum
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    Butenoyl PAF (10 mg)    1-O-hexadecyl-2-O-(2E-butenoyl)-sn-glyceryl-3-phosphocholine; Butenoyl PAF
    Thioetheramide-PC (1 mg)    1,2-dideoxy-1-(S-hexadecyl)thio-2-(N-hexadecanoyl)amino-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine; 1-Palmitylthio-2-palmitoylamido-1,2-dideoxy-sn-glycero-3-phosphorylcholine; Thioetheramide-PC
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    OP9(小鼠骨髓基质细胞)GoldCassette-TRX/TRX重组标签蛋白快速检测试剂盒(装)
    杆菌属 Lactobacillus sp.酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
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    酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactisA549/DDP, 人肺腺耐药细胞株
    猴菌嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus
    胶冻样芽胞杆菌 Bacillus mucilaginosus香菇 Lentinula edodes
    DU 145(人前列腺细胞)Calu-3(人肺腺细胞)
    动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书植物杆菌 Lactobacillus plantarum酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
    大肠杆菌 Escherichia coli紫产色链霉菌直丝变种 Streptomyces Violochromogenes var. rectus
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    侧耳 Pleurotus sp.酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
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    EPC, 大鼠血管内皮祖细胞人肺细胞
    动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次说明书公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列,5000余种产品
    1、RNA纯化系列产品
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    3、电泳及回收系列产品
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