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- 2025年07月22日
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常温
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文献和实验腹水。刚采出的腹水含有大量的油脂、巨噬细胞、杂交瘤细胞、腹腔内的上皮细胞、血液中的细胞成份等杂质，尤其是这些细胞成份，如果不除去则可能在腹水的长期保存中慢慢破裂，细胞内的蛋白质成份会释放到腹水中，增加了腹水中的杂质，使纯化变得困难，因此腹水在采集后不管是要长期保存还是立即纯化都应该先离心除去细胞的成份，同时也去掉油脂（油脂的密度比较小，一般都漂浮在腹水表面，用枪吸出丢掉即可）。单抗的纯化目前主要有这么几种： (1)盐析/沉淀法； (2)离子交换法；（3）凝胶过滤层析；（4）蛋白A或蛋白G纯化
瘤细胞培养上清液，由于其中单抗的浓度较低，应先将其浓缩10-20倍左右再检测。小鼠腹水中的单抗浓度虽很高，但也含有小鼠本身的各类Ig，它们也会与相应抗血清发生反应，使鉴定结果出现混乱，即使将腹水稀释10-20倍后再检测也不能完全避免上述情况的发生，因此一般不用腹水型单抗作为被检样品。 材料： a、小鼠IgG及其亚类IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM、IgA的抗血清。 b、0.06mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液（PH8.6）。 c、1%琼脂糖凝胶：1g琼脂糖加入100ml 0.06ml/L PH
培养无污染 （三）阳性克隆筛选 筛选方法以灵敏度高、特异性好、简便快捷为标准选择，还要考虑到抗原的具体性质。 （四）杂交瘤的克隆化 （五）杂交瘤细胞的冻存和复苏 （六）单克隆抗体的大量生产 · 体外培养法收获细胞上清 · 小鼠体内接种杂交瘤细胞收获腹水 三、单克隆抗体的鉴定 · 杂交瘤细胞核型分析 · 分泌抗体稳定性 · 单抗特异性鉴定 · 单抗Ig亚类的鉴定 · 识别
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