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Pepsin 1:10000
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北京百奥莱博科技有限公司
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名称:胃蛋白酶1:10000厂家直销
产地:国产|进口
英文名:Pepsin 1:10000
规格:10g|25g|100g
本品常用于用于制备F(ab")2抗体片段,优先水解C-末端的Phe, Leu 和 Glu,但是不水解Val, Ala 或Gly。
CAS号:9001-75-6
来源:猪胃
分子量:35 kDa
储存条件:2~8℃
酶活:250u/mg protein,474U/mg
性状:类白色粉末
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文献和实验抗体纯化:SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法
装柱后用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液平衡。标本可用硫酸铵粗提物,先10000g离心除去杂质,必要时用0.22μm滤膜过滤,上样前用1mol/l pH9.0 tris-HCl 液调整标本液pH至8.6或对平衡液透析过夜。↓加样,一般按25~30mg IgG/g湿胶比例加样,室温作用15min,用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液充分淋洗,到淋洗液OD值为↓用不同pH的枸橼酸洗脱液洗脱,流速20ml/h。如纯化小鼠IgG1一般用pH5.5;纯IgG2a用pH4.0 ;纯化IgG2b用pH
利用SPA-sepharose cl-4b 亲合层析法分离纯化IgG抗体
缓冲液平衡。 3.标本可用硫酸铵粗提物,先10000g离心除去杂质,必要时用0.22μm滤膜过滤,上样前用1mol/l pH9.0 tris-HCl 液调整标本液pH至8.6或对平衡液透析过夜。 4.加样,一般按25~30mg IgG/g湿胶比例加样,室温作用15min,用0.1mol/l pH8.6磷酸缓冲液充分淋洗,到淋洗液OD值为 5.用不同pH的枸橼酸洗脱液洗脱,流速20ml/h。如纯化小鼠IgG1一般用pH5.5;纯IgG2a用pH4.0 ;纯化IgG2b用pH
,则需要V0+Vi体积的洗脱液,才能将它们由一端洗脱到另一端。中等分子(分子大小在上述两种极限之间)所需洗脱液体积介于两者之间,Ve=V0+KdVi(0 Kd为分配系数,它表示一种物质在孔隙内的滲透程度,相当于这种物质在孔隙内所占体积和孔隙总体积的比值。 如果假定蛋白质分子近于球形,同时没有显著的水合作用,则不同大小分子 量的蛋白质,进入凝胶筛孔的程度不同,其洗脱体积决定于分子大小。当蛋白质分子量在10000~15000时,蛋白质在葡聚糖凝胶柱上层析的洗脱
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