Ni Sepharose excel 100 ml

样品体积增加后，对蛋白质的纯化效率有怎样的影响？

Expi Supernatant 进行培养。 纯化过程中，选择柱体积为 0.2 ml 的三种纯化柱：Ni Sepharose 6 FastFlow, Ni Sepharose Excel, 和 Strep-Tactin®XT 4Flow®。 分别用其纯化 60CV (column volume, 柱体积) 和 120CV 的样品，并保持上样样品中的蛋白质含量在纯化柱最大结合载量 80%-95 %。 二、实验结果 01 对比蛋白质回收效率 对于不同的填料，可以从洗脱组分中回

6xHis-tagged protein purification using Qiagen Ni-NTA Column

Buffers:Lysis Buffer (1 liter)50 mM NaH2PO4 6.90g NaH2PO4.H2O (MW 137.99g/mol )300 mM NaCl(up to 2M)17.54gNaCl(MW 58.44)or 60ml 5M10 mM Imidazole (up to 100mM)0.68g (MW 68.08 )10 mM BME (up to 20 mM)0.69 ml stock (14.4M )Adust pH to 8.0 using

要做好标签蛋白质的纯化实验，选好填料和预装柱很重要

Sepharose excel 填料能够耐受高达 100 mM EDTA 和 10 mM DTT，特别适合使用在有添加剂和还原剂存在的样品以及真核细胞表达的分泌蛋白。此款类型填料无需去除 EDTA 即可使用含有培养基的蛋白组分进行柱层析实验，极大地简化实验流程，保护蛋白活性。同时，Ni Sepharose excel 填料支持不脱 Ni 的情况下直接进行 NaOH 清洗，防止交叉污染。 GST 标签蛋白填料简介 GST 标签蛋白填料的选择 1 Glutathione Sepharose 4B 填料