Western blotting检测试剂盒(ECL发光)北京

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名称：Western blotting检测试剂盒(ECL发光)北京厂家现货
编号：XH078
产地：国产|进口
试剂盒内容：
1. 封闭试剂：30g(可配制400ml)脱脂奶粉及其他蛋白，缓冲盐等混合物。
2. 10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
3. HRP标记二抗，0.1ml，效价1：2000-5000。
4. ECL显色液，25mlA+25mlB。
试剂盒原理：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。最后经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带来（抗原所在位置）。
操作步骤：
常规电泳转膜后，
1. 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2. 按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
3. 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4. 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次5min。
6. 用稀释好的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入5ulHRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7. 用TBS-T ，PH7.6洗液，室温漂洗3次每次10min。
8. 配制ECL发光液：根据用量，取ECL发光液A、ECL发光液B各等量，混匀，加在膜正面，暗室显色5分种。先倾去显色液，再小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，请小心不要错动（余下的胶片请收好）。显色30S到1分种，取出（直接上抬）胶片立即完全浸入显影液中1-2min，再丢入定影液中1分钟，离开暗室，观察结果，根据条带强弱，可再次感光一次，并且减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。而不是标本来源来洗择。因为二抗是与一抗反应而不是与标本反应。
2. western blotting ECL发光法操作比较烦琐，但其敏感性较高，对于低丰度蛋白也能显示出结果。
3.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，延长抗体孵育时间，加长感光时间。
4. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐*(代"酸")调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）
如果实验结果无条带，可将稀释过的一抗再作1倍，10倍，50倍稀释，直接点到膜上（10ul），封闭，加二抗，最后显色，如果能显出斑点来，则证明显色系统没有问题，可从蛋白裂解和一抗上面找原因；如果无法显出，请先从显色系统寻找原因。

Western blotting检测试剂盒(ECL发光)北京厂家现货正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·5×蛋白上样缓冲液（配有β-巯基乙醇）
编号：XH056
规格：10ml
产品简介：
本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，β-巯基乙醇，*酚蓝，缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异，SDS还可以断开分子内和分子间的*键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，β-巯基乙醇可以断开半胱*酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。*酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。
保存时间：
未混合前2-8℃可保存一年，混合后保存三个月。
使用说明：
1． 根据用量，以每1ml的5×蛋白上样缓冲液加入50ulβ-巯基乙醇，混匀。此即为配好的蛋白上样缓冲液。此配好的蛋白上样缓冲液在2-8℃保存三个月。
2． 请按每40微升蛋白样品加入10ul配好的上样缓冲液的比例来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。
3． 混匀后，100℃水浴加热3-5分钟，使蛋白变性。
4． 冷却到室温后，离心数秒后，混均再离心30秒取上清直接上样即可。
注意事项：
β-巯基乙醇味道特别难受，所有操作最好是在通风柜中操作。如果没有通风柜，也尽量找一通风处操作，或者使用5×蛋白上样缓冲液（含DTT）。
8%胶时*酚蓝大概在30kd左右， 12%胶时，约在20kd左右，15%胶时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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