cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)现货促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)现货促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)现货促销
编号：WE0133
品牌：百奥莱博
英文名：BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
规格：100次
  本试剂盒是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA Eraser的组分，经过 gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型高效反转录酶BalbScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，cDNA第一链合成的效率和产量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。如逆转录产物cDNA用于下游荧光定量检测，可在42℃，15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
gDNA Eraser	12.5μl	50μl
10×gDNA Eraser Buffer	30μl	120μl
BalbScript，200 U/μl	25μl	100μl
5×ScriptRT Buffer	120μl	500μl
Primer Mix	30μl	120μl
RNase-Free Water	1ml	2×1ml

产品特点
1、快速去除基因组：含有去除基因组DNA 的gDNA Eraser，只需2min即可除去基因组DNA。
2、快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA第一链合成。
3、灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4、高效的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。
2、逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于-20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。
3、反应体系可倍比放大，10μl反应体系可最大使用1μg总RNA。
4、Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成， 也可根据实验需要选用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
5、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号为WE0223。
6、对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤：
将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应
1、根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性，先按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，最后加入RNA样品。

试剂	10μl反应体系
10×gDNA Eraser Buffer	1μl
gDNA Eraser	0.5μl
RNA Template	10 pg-1μg
RNase-Free Water	up to 10μl

注意：如果总RNA量大于1μg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)，该产品货号为WE0223。

2、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、42℃孵育2分钟(室温反应时，可以延长到30分钟)。
4、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1、根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10μl到每个反应管中，取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
 

试剂	20μl反应体系
步骤1反应液	10μl
BalbScript，200 U/μl	1μl
Primer Mix	1μl
5×ScriptRT Buffer	4μl
RNase-Free Water	4μl

注意：可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20μl 反应体系Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

2、混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
3、cDNA合成反应条件：
1)若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。
注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。
4、反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时间保存，请置于-20℃。
注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

关于cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)现货促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
L-异亮*酸 Parafuchsin hydrochloride 73-32-5
002008 枸橼酸纳抗凝马血 100ml|500ml
鲁哥氏染色液(Lugol"s碘液,5%,无菌)   100ml|500ml
四氧嘧啶 (1S,2S)-(?)-1,2-Diphenylethylenediamin*(代"e") 2303-01-7 
儿茶素 COA 225937-10-0或154-23-4
脑脊液总蛋白检测试剂盒(邻*三酚红钼比色法)   50T|100T
ARB11458 人透明质酸结合蛋白(HABP)检测服务 Human hya]uronate binding protein,habp ELISA KIT
BTN131046 n-十二烷基-β-D-麦芽糖苷 n-Dodecyl-β-D-Maltoside
ARB11474 人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)酶标法分析 Human insulin-like growth factors binding protein 2,igfbp-2 ELISA KIT
ARB12636 大鼠雄烯二酮(ASD)Elisa方法检测 Rat androstenedione,asd ELISA KIT
PY08-025  三糖铁琼脂斜面  10支/盒，用于革兰氏阴性肠杆菌的生化鉴定
酵母聚糖A L-Alanine methyl ester hydrochloride 58856-93-2
NP-40裂解液   50ml|100ml
ARB13924 猪层连蛋白/板层素(LN)elisa检测 Porcine laminin,ln ELISA KIT
BTN60209 盐*(代"酸")四环素溶液 Tetracycline HCl Solution
ARB13235 小鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)检测服务 Mouse lymphotactin,lptn/ltn ELISA KIT
cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)现货促销关键词：cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA),WE0133,BalbScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit

甲基磺酸乙酯 Magnesium trisilicate 62-50-0
Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH8.0)   100ml
聚对丙*(代"烯")基茴香醚* Deoxycholic acid sodiu*(代"m") salt 27206-35-5
鲁米诺单*盐 Cholesterol esterase from pseudomonas sp 20666-12-0
PL0601 酵母高纯度质粒小量快速提取试剂盒
F020234 山羊抗人γ链抗体 Goat Anti-Human IgG(γ chain)
ARB10728 人红细胞生成素抗体(EPO)ELISA代测服务 Human erythropoietin,epo ELISA KIT
HC0130 大张滤纸
SJ0735 人粒细胞分离液
F030438 胶体金标记山羊抗人IgM抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*GOLD
N-乙酰-L-肉碱盐*(代"酸")盐 G-6-PD 5080-50-2
BL1416 "Western blotting(山羊IgG)
RNA杂交缓冲液(含甲酰胺)   100ml
SJ0238 Mimumum Essentiul Medium(MEM)
细胞色素C Sodium dodecanoate 9007-43-6
BTN130831 丝状真菌线粒体DNAOUT Filamentous Fungal mtDNAOUT
ARB12511 大鼠载脂蛋白A1(Apo-A1)代做ELISA实验 Rat apoprotein a1,apo-a1 ELISA KIT
非变性电泳高分子量蛋白Marker（66-669 kD） 20次
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·高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
编号：WE0189
英文名称：CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
规格：10次|50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法，同时配备延伸管，可处理多达5ml样本，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	10次	50次
Buffer CL	45ml	220ml
Buffer CB(浓缩液)	60ml	300ml
Buffer GTL	15ml	60ml
Buffer GW1(浓缩液)	3ml	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	3ml	15ml
Buffer EBL	2ml	10ml
蛋白酶K	100 mg	3×180 mg
蛋白酶K 储存液	5ml	30ml
吸附柱DG及收集管	10套	50套
延伸管(20ml)	10个	50个
连接管	10个	50个
离心管(L-1.5 m l)	10个	50个

保存条件：吸附柱DG置于2～8℃，其他组分室温(15～30℃)

产品特点：
1、适合大体积样本：试剂盒使用负压法，配备延伸管，配套使用负压装置可将样品处理量提高至5ml。
2、提取得率高：使用高效微量吸附柱结合目的片段，有效提升核酸的回收率，洗脱体积可在10-150μl之间灵活变化，可浓缩低浓度核酸。
3、纯度高：经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可即用于下游各种应用，包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。

自备试剂：无水乙醇、异丙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向每管蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(10次加5ml/50次每瓶加9ml)的蛋白酶K 储存液，使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15～30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致DNA提取量下降。
3、本试剂盒最多可以从5ml血清血浆、4ml尿液中提取cfDNA。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
6、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解，混匀后使用。
7、实验开始前将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
9、负压装置。

操作步骤(血清、血浆样本1-5ml)：

1、样品处理：向离心管(自备)中加入1ml血清/血浆样本，若样本不足1ml，加入PBS溶液补至1ml体积。
注意：当样品量超过1ml时，请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体
2、向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
3、加入800μl Buffer CL，剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
5、加入1800μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，颠倒混匀10次或剧烈震荡15-30秒。
6、冰浴5分钟。
7、正确连接负压装置，将连接管插到负压装置的插口上。
8、将吸附柱插入到连接管上。
9、将延伸管插入开盖的吸附柱中。
注意： 确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固，防止发生漏液。
10、将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中，开启并调节负压至-900～-800 mbar，缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走，关闭负压开关，当压力恢复至0 mbar时，小心移去延伸管。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
12、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，开启并调节负压至-900～-800 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
13、向吸附柱中加入750μl无水乙醇，开启并调节负压至-800～-900 mbar，待溶液完全吸走，关闭负压开关。
14、当压力恢复至0 mbar时，将吸附柱取下，置于新的收集管中，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
15、将吸附柱置于新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer EBL，室温放置3分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

附表1：不同血清/血浆样本量推荐加入试剂量
 

加入物	加入量(ml)
样本	1	2	3	4	5
蛋白酶K	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
Buffer CL	0.8	1.6	2.4	3.2	4
Buffer CB	1.8	3.6	5.4	7.2	9

储存条件：室温(15～30℃)。

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)现货促销。