microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家
编号：ALH189
规格：25次
英文名：First strand synthesis kit of cDNA corresponding to miRNA
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A 尾Poly(A)，再使用Anchored oligo(dT)通用逆转录引物进行逆转录反应，最终生成miRNA 对应的cDNA 第一链。miRNA cDNA 第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)修饰过程和逆转录过程的所有试剂，该试剂盒具有高效的Poly(A)修饰和逆转录效率， 可从20pg-2μg 的total RNA 中有效制备miRNA对应的cDNA 第一链。一次合成的cDNA可检测多个microRNA，节约了样品和成本。（该试剂盒可与miRNA荧光定量PCR检测试剂盒（ALH190）配套使用。）

试剂盒组分(25次)：
E.coli Poly(A) Polymerase(5U/μl)————————50U
10 × Poly(A) Polymerase Buffer—————————100μl
10 × rATP solution———————————————50μl
25μmol RT primer————————————————50μl
RTase (200U/μl)-————————————————5000U
5×RT Reaction Mix-———————————————200μl
RNase free H2O-—————————————————1ml

注意事项：
用本试剂盒合成得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时，可以根据实际情况选择使用量，如果发现有非特异扩增条带，或者融链曲线显示有非特异扩增，往往提示cDNA模板过量， 可以将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再使用。

储存条件：-20℃。

本品别名：miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒|microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒

我公司的microRNA对应的cDNA第一链合成试剂盒厂家，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
编号：ALH011
英文名称：Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒适用于动植物组织、动植物培养细胞的总RNA提取，采用改进的异硫*酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫*酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

试剂盒组份：

 

组份	20次	50次
裂解液RL	20ml	50ml
去蛋白液RE	15ml	25ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
吸附柱和收集管	20套	50套

储存条件：室温，有效期一年。(裂解液RL需4℃避光保存)

注意事项：
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂*仿，使用前需要自备*仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE（PH 8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后，加*仿前，样品可在–60℃～70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA，推荐细菌RNA提取试剂盒（目录号：ALH027和ALH029）。

操作步骤（实验前请先阅读注意事项）
 提示：第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 匀浆处理
a. 组织
将组织在液氮中磨碎，每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量（每10cm2加1ml）。一般情况下，普通大小的细胞培养瓶，加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶，轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞，小心弃上清。每5~10×106的动物细胞或植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。
2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15～30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 可选步骤：4℃的条件下12,000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8℃的条件下以12,000rpm离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA，而上层的超浮游物含有RNA。
4. 每1ml RL加0.2ml*仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
5. 于4℃12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%，把水相小心转移到新管中（不要触碰中间层），记录水相体积。
6. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱中（吸附柱套在收集管内，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中，请分两次转入吸附柱中。) ，12,000rpm离心45秒，弃废液，将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500μl 去蛋白液RE，12000rpm 离心45 秒，弃废液。
8. 加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心45秒，弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 将吸附柱放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water，室温放置2分钟，12000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟，或者另外再加30μl RNase free water，离心1分钟，合并两次洗脱液。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA 洗脱效率，减少RNA产量。

本制品别名：超纯RNA提取试剂盒|RNA快速提取试剂盒|总RNA快速提取试剂盒|超纯总RNA提取试剂盒|植物RNA提取试剂盒|动物RNA提取试剂盒|培养细胞RNA提取试剂盒


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·2×Real-Time PCR预混液
编号：ALH187
英文名称：2×Real Time PCR Mix
规格：40μl×50次|50μl×200次
本品是采用Probe探针杂交法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液等试剂预混成一种适合Real Time PCR反应检测用2×Premix Type试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。本品采用全新的HotMaster Taq DNA热启动聚合酶可以有效抑制非特异的PCR扩增，大大提高扩增效率，进行高灵敏度的Real Time PCR反应。HotMaster Taq DNA聚合酶利用抑制剂通过温度调节方式封闭HotMaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点，温度低于40℃时，形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生，大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。

试剂盒组分(40次)：
2×Probe PCR Mix————————1ml

注意事项：
1. 本制品不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2. 本制品含有4 mM MgCl2（反应体系终浓度是2 mM Mg2+），可用25mM MgCl2 优化Mg2+浓度。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

·Gateway entry clone构建试剂盒
编号：ALH328
英文名称：Gateway entry Clone Construction Kit
规格：20次
本试剂盒采用了世界最先进的定向拓扑异构酶克隆技术可以在5分钟内将待表达目的基因（高保真酶扩增的平末端片段）一步法定向克隆到Gateway入门载体，得到的入门克隆可以和各种Gateway目的载体通过LR重组反应，生成表达克隆。方便目的基因在原核/哺乳动物细胞/酵母/昆虫表达系统切换表达。

试剂盒组份：
Gateway入门载体(30ng/μl)—————20μl
10×Enhancer-———————————20μl

产品特点：
1. 简单快速，加入待表达基因片段室温仅需5分钟便可完成入门克隆构建。
2. 定向克隆技术，超过90%插入为正确方向插入，减少克隆筛选耗费的时间。
3. 构建的入门克隆不含原核表达Shine-Dalgarno（SD)序列，因此构建原核表达克隆时应选择带SD序列的目的载体进行Gateway LR重组。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

本制品别名：Gateway入门克隆构建试剂盒


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SV0595 PmeI限制性内切酶 PmeI Restriction Endonuclease
WE0202 新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I) RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
BTN3190 水饱和酚 Water-Saturated Phenol
SV1060 小牛肠碱性磷酸酶（CIP） Calf intestinal alkaline phosphatase (CIP)
RFT021 DNA Marker IV(500～7000bp)
KFS147 活细胞核酸染料-绿菁SYTO
SY0384 牛凝血酶(高活力，>2000 IU/mg) Bovine Thrombin
SV0181 BsiHKAI限制性内切酶 BsiHKAI Restriction Endonuclease
BTN70102C 蛋白marker(43～200kD) Protein Marker(43-200kD)
HR0233 线粒体提取试剂盒 Mitochondrial Extraction Kit
SY0024 常规DNA聚合酶 Taq DNA Polymerase
YT110 Alexa Fluor350抗小鼠免疫荧光染色试剂盒 "Immunol Fluorence Staining Kit with Alexa Fluor 350-Labeled Goat 

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