北京酵母基因组DNA大量提取试剂盒说明书

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京酵母基因组DNA大量提取试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京酵母基因组DNA大量提取试剂盒说明书
品牌：百奥莱博
规格：10次
产地：国产|进口
英文名：Yeast DNA Massive Extraction Kit
本试剂盒用于快速的从酵母中大量提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下， 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

试剂盒组份：
酵母裂解液——————100ml×2
蛋白沉淀液——————70ml
DNA溶解液 ——————30ml

产品特点：
1.不需要使用有毒的*酚、*仿等试剂。
2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。

操作步骤：
1. 吸取60ml-70ml 酵母培养物到一个100ml 离心管；2,500 x g 离心2 分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。
2. 高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。
3. 加入20 ml 酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1 毫升的枪头反复吹打混匀。酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。
4. 将裂解物放置在70℃水浴15-30 分钟。
如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。
5. 冰上至少5 分钟使回复到室温。
6. 在回复到室温的裂解物内加入6.8 ml 蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25 秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5 分钟。
7. 2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5 分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
8. 小心缓慢吸取上清到一个新的100ml 离心管中，不要吸到沉淀。吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2 分钟后取上清。
9. 加入等体积的室温异丙醇，颠倒30 次混匀或者直到出现絮状DNA 沉淀（或者白色浑浊沉淀）。
10. 2,500 x g 离心5 分钟(可根据需要调整加大离心力)，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。
11. 加入20ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA 沉淀，2,500 x g 离心2 分钟， 倒去上清（注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
12. 加入1-3ml DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60 分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。
13. 加入0.5-1ml RNase A（10mg/ml），颠倒混匀，37℃温育30－60 分钟去除残留RNA。该步骤主要作用为去除残留的RNA，如果残留RNA多，可以适当延长时间或者增加RNase A 用量。如果残留RNA 不影响实验，可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验，也可以用等体积酚/*仿抽提去除，然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。
14. DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

储存条件：室温，有效期12个月。

本品别名：酵母基因组DNA大量提取试剂盒|酵母DNA大量提取试剂盒|大龄酵母DNA提取试剂盒

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·总RNA提取试剂(组织/细胞/液体样本)
编号：ALH003
英文名称：Total RNA extraction reagent From Tissue,Cell and Liquid Sample
规格：50ml|100ml
本试剂是直接从来源于人，动植物，酵母，细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入*仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。

无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。本试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。本试剂抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。

本试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用*化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。

注意事项：
1. 当本试剂用量少于2ml时建议使用清洁的一次性的聚丙材质试管。
2. 当本试剂用量较大时，可以使用玻璃试管(Corex)或聚丙材质试管，事先检验以确保该试管可以耐受加入本试剂和*仿后12,000×g的离心力。不可使用有裂缝或者破损的试管。
3. 离心前小心平衡试管。
4. 离心前玻璃管口必须盖上铝箔并用石蜡膜封口，聚丙*(代"烯")管必须盖紧。
5. 从少量的组织(1~10mg)或细胞(102~104)中分离RNA 样品：调整样品体积到0.25ml，往组织或细胞中加入0.75ml 本试剂。待样品裂解后，加入*仿并进行步骤2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀RNA 之前，加入5~10μg 无RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入*仿前用26 号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。Glycogen 会留在水样层中并和RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制PCR。
6. 在匀浆化后和加入*仿之前，样品可以在–60~–70℃ 保存至少一个月。RNA 沉淀（步骤4，RNA 漂洗）放置于75%的乙醇在2~8℃ 至少可以保存一周，在–5~–20℃下至少可保存一年。
7. 台式离心机最大能达到2,600×g 的离心力的，如果将离心时间延长到30~60 分钟可以满足步骤2 和步骤3 中的操作。

储存条件：4℃，有效期12个月。


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·PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)
编号：ALH378
英文名称：PAGE protein staining kit
规格：250ml|1000ml
本试剂盒适用于快速检测PAGE胶上的微量蛋白质，它的敏感度几乎可以达到银染的敏感度（ng级水平或者更高），但是比银染简单、稳定、重复性高。染色液所含有的成份和PAGE胶中的SDS、TRIS共同作用形成特殊复合物沉淀在胶基质中形成白色的背景染色。有蛋白的地方，蛋白质的存在干扰这种复合物沉淀的形成，因此蛋白条带仍旧保持透明无色，在黑色的背景下，就可以清晰见到透明的蛋白条带。

试剂盒组份(250ml)：
染色液—————————250ml
显色液—————————250ml
脱色液—————————125ml

产品特点：
1.电泳后采用两个简单步骤，15分钟内完成全部过程。
2.环保染料，完全不含有各种醋酸、甲醇等有毒有刺激性成份。
3.蛋白条带为不透明白背景上的透明条带，灵敏度为传统方法的10倍以上（纳克级或者更高）。
4.可逆染色，完全不影响蛋白性质，不影响抗体抗原结合性质。如果需要可以脱色15分钟后继续做蛋白电洗脱（切下特定条带脱色后洗脱下来可以用来做抗原生产使用）、定量、Western blot实验、质谱分析、N末端测序等。
5.在普通双蒸水中可以保留一年以上，不退色，缩小，蛋白质不扩散，一年后依然可以用来做Western blot等蛋白微分析。

操作步骤：
1. 染色
1) 电泳后用清水冲洗胶30-60 秒钟，然后将PAGE 胶放置于一个透明的玻璃培养皿中，根据胶大小倒入适量的染色液（确保胶都浸没在染色液内，20-25ml 足够染色一块普通的8×10cm mini 胶了），摇床上轻摇染色10-15 分钟(10-15%胶15 分钟，5-7.5%胶可缩短时间到10 分钟)。
2) 倒弃染色液，加入20-25ml 的显色液，立刻同时用手轻摇胶显色0.5-1 分钟（将透明培养皿放在一个黑色（暗）背景上观察条带出现情况，此时在不透明的白背景上应该看到透明的蛋白条带，不要显色时间过长，过长反而会降低分辨率）。
3) 看到满意条带后，用清水冲洗1-2 分钟后，放置于蒸馏水中保存。
2. 脱色
1) 根据个人需要将所需目的条带切下后或者直接整块胶加入适量脱色液，摇床上轻摇10 分钟或者直到脱色完全，最后用清水冲洗几次。
2) 现在胶可以用于蛋白电洗脱，Western blot 等操作，或者可以再用传统方法永久染色。

问题与解决方法
●没有见到条带可能的原因分析
1. 应该把透明培养皿放在黑色背景上看，条带为黑背景上面透明的条带。
2. 染色过头了。染色时要在暗背景上监测蛋白条带出现情况，一旦见到满意条带要立刻用蒸馏水冲洗停止染色。对于已经染色过头的胶，可以用脱色液部分脱色（胶脱色后，还可以再次反复染色）。
3. 蛋白浓度太低了，检测上样蛋白的浓度。
●干胶后，条带不见了可能的原因分析
这是一种可逆的负染色方法，干燥以后蛋白条带就和背景区分不出来了，因此不可以做成干胶。如果要长期保存，可以脱色后再用传统方法染色保存。
●染色后未脱色即直接转膜做Western blot效果不好可能的原因分析
应该脱色后才转膜做Western blot。

储存条件：室温避光，有效期12个月。


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·超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
编号：ALH011
英文名称：Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
规格：20次|50次
本试剂盒适用于动植物组织、动植物培养细胞的总RNA提取，采用改进的异硫*酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫*酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

试剂盒组份：

 

组份	20次	50次
裂解液RL	20ml	50ml
去蛋白液RE	15ml	25ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
吸附柱和收集管	20套	50套

储存条件：室温，有效期一年。(裂解液RL需4℃避光保存)

注意事项：
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂*仿，使用前需要自备*仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时，如需稀释RNA样品应该用TE（PH 8)，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后，加*仿前，样品可在–60℃～70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA，推荐细菌RNA提取试剂盒（目录号：ALH027和ALH029）。

操作步骤（实验前请先阅读注意事项）
 提示：第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 匀浆处理
a. 组织
将组织在液氮中磨碎，每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量（每10cm2加1ml）。一般情况下，普通大小的细胞培养瓶，加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶，轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞，小心弃上清。每5~10×106的动物细胞或植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。
2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在15～30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 可选步骤：4℃的条件下12,000rpm 离心10分钟，小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8℃的条件下以12,000rpm离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA，而上层的超浮游物含有RNA。
4. 每1ml RL加0.2ml*仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
5. 于4℃12,000rpm 离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%，把水相小心转移到新管中（不要触碰中间层），记录水相体积。
6. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱中（吸附柱套在收集管内，若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中，请分两次转入吸附柱中。) ，12,000rpm离心45秒，弃废液，将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500μl 去蛋白液RE，12000rpm 离心45 秒，弃废液。
8. 加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心45秒，弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 将吸附柱放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water，室温放置2分钟，12000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟，或者另外再加30μl RNase free water，离心1分钟，合并两次洗脱液。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积最好不少于30μl，体积过小降低RNA 洗脱效率，减少RNA产量。

北京百莱博科技有限公司专业生产DNA纯化产品，欢迎来电咨询选购北京酵母基因组DNA大量提取试剂盒说明书。