北京现货一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒厂家直销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京现货一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒厂家直销是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒厂家直销
编号：WE0148
品牌：百奥莱博
英文名：BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0148-100次	WE0149-100次	WE0150-100次
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	100μl	100μl	100μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。


使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(可选)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s

注意：
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

除北京现货一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒厂家直销外，我公司正在打折促销以下产品：

·蛋白印迹膜再生液
编号：WE0304
英文名称：Stripping Buffer
规格：100ml|500ml
  本产品采用温和洗涤配方，可在不影响目的蛋白的情况下，去除结合在印迹膜上的一抗和二抗，使同一张膜可进行多次抗体检测，无需反复电泳和转膜，节省样品和时间，适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。

注意事项：建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白，如内参蛋白等。

操作步骤：
1、将曝光后的膜取出，加入适量的Stripping Buffer(蛋白印迹膜再生液)，再生液充分覆盖膜表面，8.5 cm×5.5 cm膜加入15ml左右蛋白印迹膜再生液，室温振摇孵育15分钟左右(孵育时间应根据不同的目的蛋白来调整：比如内参抗体等表达量较高的蛋白，使用蛋白印迹膜再生液时可以延长孵育时间至1小时或者在37℃孵育30分钟)。
2、弃去蛋白印迹膜再生液，用15ml缓冲液(PBST或TBST)洗膜3次，每次5 分钟，室温振摇。
3、为了检测酶标二抗洗脱是否完全，此时可以用显色方法来确定二抗是否洗脱掉。
4、待检测完毕，确认膜上无残留的酶活性，再生后的膜通过加入15ml的封闭液进行封闭，室温30分钟或者4℃封闭过夜。
5、重新加入待测一抗，进行下一轮的WB实验。

储存条件：室温


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·蛋白快速染色液
编号：WE0278
英文名称：FastStain Protein Staining Reagent
规格：500ml
  本产品采用独特的配方，可对电泳后凝胶上的蛋白质条带进行染色，而对凝胶本底几乎没有着色。染色过程仅需15分钟，染色后几乎不需要脱色。本产品灵敏度高，可检测到15ng BSA蛋白；若实验对检测灵敏度有较高要求，可将凝胶放置在染色液中2小时，可达到最大灵敏度(BSA：5ng)。

注意事项：
1、操作时请务必佩戴手套，如溅到皮肤上，请立即用大量水冲洗。
2、染色前的凝胶洗涤非常重要，否则会造成凝胶染色背景加深。
3、如染色后有轻微背景，可将染色后的凝胶用过量蒸馏水室温洗涤、脱色。
4、本产品适用于变性和非变性凝胶电泳后的蛋白染色。

操作步骤：

I 常规操作步骤：
1、常规PAGE电泳完成后，小心取下凝胶，根据凝胶的大小，将其放置在一个可微波加热的容器中。
2、加入足量的纯水，使凝胶可以在其中自由晃动，微波加热至沸腾。室温晃动2 min，彻底弃去水。
3、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到纯水洗涤后的凝胶的盒中，使其足以没过凝胶，轻轻晃动。并在微波炉中高火加热至沸腾，取出后室温轻轻摇动，5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色，15 min后显色基本完成。
注意：此操作检测的灵敏度为：用BSA检测，灵敏度为15ng。若实验对检测灵敏度有较高要求，可将凝胶放置在染色液中2小时，可达到最大灵敏度(用BSA检测，灵敏度为5ng)。

II 快速助染步骤：
1、常规PAGE电泳完成后，小心取下凝胶，根据凝胶的大小，将其放置在一个可微波加热的容器中。
2、加入足量的纯水，使凝胶可以在其中自由晃动，微波加热至沸腾。室温晃动2 min，弃去水。
3、重复步骤2两次。
4、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到含纯水洗涤后的凝胶的盒中，使其足以没过凝胶，轻轻晃动后，微波高火加热至沸腾，取出后置于室温并轻轻晃动，5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色，15 min后显色完成。
注意：此操作检测的灵敏度为：用BSA检测，灵敏度为5ng。

储存条件：室温


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