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北京百奥莱博科技有限公司
100次|200次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括高纯质粒小提试剂盒品牌在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:高纯质粒小提试剂盒品牌
产地:国产|进口
编号:RFT028
规格:100次|200次
品牌:百奥莱博
● 试剂盒内容及保存:试剂盒组成 100次 200次 贮存方式
RNase A 300 μl 600 μl -20℃
Lysis Dye 600μl 2×600μl 室温
溶液P1 30 ml 60 ml 室温
(加入RNase A后2-8℃保存)
溶液P2 30 ml 60 ml 室温
溶液P3 40 ml 80 ml 室温
去蛋白液PD 60 ml 120 ml 室温
漂洗液PW 25 ml 2×25 ml 室温
洗脱缓冲液EB 15 ml 15 ml 室温
质粒吸附柱CP 100个 2×100个 室温
收集管(2 ml) 100个 2×100个 室温
说明书 1份 1份
● 储存条件和效期:本试剂盒在室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2–8℃保存,可稳定保存半年。
● 产品简介及使用说明:本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性,可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而,对质粒纯度要求更高的转染实验(要求无内毒素),此试剂盒不能达到要求。另外,尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒(>10kb),但我们不推荐使用。如果一定要使用,请参考以下方法:加大菌体使用量(使用5–10 ml过夜培养物),同时按照比例增加P1、P2、P3的用量;洗脱缓冲液应在70℃预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率,其它步骤相同。
● 产品特点:1使用了Lysis Dye,菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验,所以我们增加了Lysis Dye(一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂)来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后,Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色;加入P2后,Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色,裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清,如果红色非常均一,表明裂解充分;在完全裂解的体系中加入P3混匀后,体系立即变为黄色,任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。
2 增加了去蛋白液PD,能更加彻底地去除蛋白污染,得到纯度更高的质粒。
● 准备工作:1 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中(如15ml P1中加入150μl RNase A),混匀后4℃贮存。
2 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3 每次使用前请检查溶液P2,溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
● 使用Lysis Dye的标准操作步骤:如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,10,000g 离心1分钟,尽量吸除上清。
注:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA)和5μl Lysis Dye,使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀,此时溶液为浑浊的红色。
注:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3.加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解,此时溶液变为澄清的红色。
注:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间绝对不应超过5分钟 ,以免质粒受到破坏;红色溶液应该透明均一,如有浑浊红色颗粒,表明裂解不充分,会大大降低质粒提取效率。
4.加入350 μl溶液P3,立即温和地上下翻转,充分混匀,混匀充分的标志是溶液完全呈透明的黄色,如有可见红色,说明混匀不彻底。10,000g 离心10分钟。
注:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。
5.小心地将上清转移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中),10,000g离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD,10,000g离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
7.向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
8.向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW,10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液。
9.将吸附柱CP置于重新放回收集管中,10,000g 离心2分钟。
注:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,绝对不可省略,因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验(酶切,PCR等)。
10.将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,10,000g 离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中,-20℃保存。
注:● 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中,再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低
洗脱效率。
●不使用Lysis Dye的标准操作步骤:如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中,10,000 g离心1分钟,尽量吸除上清。
注:菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。
2.向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3.加入250 μl溶液P2,温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解。
注:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA;所用时间绝对不应超过5分钟,以免质粒受到破坏。
4.加入350 μl溶液P3,立即温和地上下翻转6–8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。10,000g 离心10分钟。
注:P3加入后应立即混合,避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。
5.小心地将上清转移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD,10,000g离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
7.向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CP重新放回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW,10,000g 离心30–60秒,倒掉收集管中的废液。
8.将吸附柱CP置于收集管中,10,000g 离心2分钟。
注:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,绝对不可省略,因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验(酶切,PCR等)。
9.将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中,-20℃保存。
注:● 为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中,再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
除高纯质粒小提试剂盒品牌外,我公司正在打折促销以下产品:
·250bp DNA ladder(250-5000bp)
编号:RFT006
规格:100次
● 产品简介:
本产品是由9条带状双链DNA组成,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。本产品为即用型产品,已含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。 本产品中9条带为250,500,750,1000,1500,2000,2500,3000,5000bp,其中1500bp条带为100ng/5μl,其余条带浓度为50ng/5μl。
● 储存条件:4℃ 贮存6个月,-20℃贮存 1年。
● 使用方法:1.取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl,如果加样孔宽于5mm,可以适当增加上样量)就行电泳。
2.建议电泳条件:凝胶浓度为1.0%,凝胶长度8-10cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间30-35分钟。
3.通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注:如果使用Goldview等染料就行染色,由于灵敏度比EB低,请酌情增加Marker的上样量。
● 注意事项:1.琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2.请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
高纯质粒小提试剂盒品牌关键词:高纯质粒小提试剂盒,百奥莱博,RFT028
BL0546 PHA-P 植物血球凝集素P
ARB13901 猪血管内皮生长因子(VEGF)Elisa定量检测 Porcine vascular endothelial cell growth factor,vegf ELISA KIT
6%绵羊红细胞 100ml
BL0930 RBITC标记羊抗鸡IgG抗体
BL1053 MRS肉汤
SJ0273 Ficoll 400 聚蔗糖400
孔雀绿草酸盐 Cuprizon 2437-29-8
ARB11483 人胰淀粉酶(PAMY)Elisa分析 Human pancreatic amylase,pamy ELISA KIT
DN2601 DNAzol 基因组DNA快速提取试剂
BTN130923 LAMP扩增阳性对照 LAMP Positive Control
ARB12735 小鼠I型前胶原C末端肽(CICP)Elisa方法检测 Mouse cross-linked c-teloPeptides of type i collagen,cicp ELISA KIT
ARB13483 鸡细胞间粘附分子-1(ICAM-1)elisa检测说明书 Chicken intercellular adhesion molecule 1,icam-1 ELISA KIT
PY02-445 TPGYT培养基基础 250克
D-核糖 Fuchsin basic 50-69-1
BTN100819 MDS 42T7lac菌种 MDS 42T7lac Strain
N-苯基代邻氨基苯甲*(代"酸") TEMPO 91-40-7
91079-40-2 Casein acids Hydrolysate 酸水解干酪素
BTN101118 水样病毒沉淀剂 Water Sample Virus Precipitation Reagent
BTN80920 96孔板血液DNAOUT(离心法) 96 Microwell Plate Blood DNAOUT
乙酰辅酶A 2-Aminothiazol-4-acetic acid 102029-73-2
25322-68-3 PEG12000 聚乙二醇
HC0253 多道可调移液器整支可消毒系列
高纯质粒小提试剂盒品牌关键词:高纯质粒小提试剂盒,百奥莱博,RFT028
·双色预染宽分子量蛋白Marker(10-170KD)
编号:RFT052
规格:20次
● 储存条件:-20℃保存,开封后有效期12个月
● 产品简介:
本产品包含10种纯化的预染蛋白质组成,分子量范围为10kD-170kD,其中70kD条带为红色,10kD条带为绿色,其余条带为蓝色,可以用于SDS-PAGE和Western Blot转膜时确定未知蛋白的分子量。
● 使用说明:a 第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用。
b-20℃取一管样品,彻底融化,上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl,其他规格梳子请适当调整上样量。
c 电泳结束后,可以直接在胶上观察结果。
d 预染蛋白Marker在不同的凝胶系统中迁移率会有不同,因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小,请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。
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