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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
EDTA Buffer(50×)
- 库存:
877
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)价格
编号:WE0319
规格:100ml
英文名:EDTA Buffer(50×)
产地:国产|进口
福尔马林固定时,组织中的许多*基酸残基形成醛键、羧甲键而封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联也使抗原决定簇隐蔽。因此,对于石蜡切片,要求在进行IHC染色前,先进行抗原修复,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,恢复抗原的原有空间形态。EDTA缓冲液是除柠檬酸缓冲液外另一种常用的IHC 抗原修复液。有部分抗原用EDTA缓冲液修复效果好于柠檬酸缓冲液。
注意事项:
1、请使用足量的修复液,修复过程中保证组织切片完全浸没在修复液中。
2、使用沸水浴或高压修复时,操作请务必谨慎,尤其高压修复时,保证锅内有足量的修复液,以防止干烧。
3、推荐的修复时间为达到理想修复效果所需时间,如组织粘片不牢,容易掉片,请酌情减少修复时间。
操作步骤:
1、高压热修复:根据需要量,取适量本品,稀释50倍后即可使用。将稀释好的修复液加入高压锅内,将待修复切片浸于其中,保证修复液没过组织(最好将切片浸入盛修复液的塑料容器内,再置于锅内修复液浴中),盖上压力锅盖,加热至均匀喷汽,从喷汽开始计时,1~2 分钟后压力锅离开热源,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水冲洗后,再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次,每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度最大,是最常用的热修复法。
2、微波热修复:根据需要量,取适量本品,稀释50倍后即可使用。将切片放入盛有修复液的容器中,置微波炉内加热至沸腾,停止加热,使容器内液体温度下降保持在95℃~98℃之间并持续 10~15分钟(注意:请根据具体机型酌情设置条件,务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器,自然冷却至室温,取出切片,蒸馏水冲洗后,再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次,每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。此方法修复强度大于沸水浴,但小于高压修复。
3、沸水浴热修复:根据需要量,取适量本品,稀释50倍后即可使用。将待修复切片完全浸入盛有修复液的容器中,并将此容器置于盛去离子水的大器皿水浴中,电炉上加热煮沸,从修复液的温度到达95℃起开始计时15~20分钟。让切片在修复液中自然冷却至室温,蒸馏水冲洗,再用 PBS(0.01M pH7.4)漂洗 2 次,每次 3分钟。下接免疫组化染色步骤。该方法效果较微波和高压修复差。
储存条件:2~8℃
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BTN130986 即用型热启动PCR试剂盒 Instant Hotstart PCR Mix
BTN120696 土霉素盐*(代"酸")盐溶液 Oxytetracycline HCl Solution
北京EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)价格关键词:WE0319,IHC抗原修复液,50×,EDTA缓冲液,EDTA Buffer(50×),EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)
·miRNA提取试剂盒
编号:WE0195
英文名称:miRNA Purification Kit
规格:50次
本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA, 还可以提取siRNA,snRNA等其他小于200nt的小分子RNA,同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合,独特的裂解液在有效抑制RNases的同时,可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中,如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广,制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| TRIzon Reagent | 60ml |
| Buffer RWT(浓缩液) | 15ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融,否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
方法一:miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织:将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent,震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞:吸去培养液,加入TRIzon Reagent,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液:离心得到细胞沉淀,弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清:取200μl血浆或血清样本,加入5倍体积TRIzon Reagent,震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使其充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤:4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心5分钟,取上清,转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等,可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿,每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟,样品分为三层:红色有机相,中间层,无色水相,将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇, 混匀,将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,离心后弃掉吸附柱RM,保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇,混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中,重复步骤13。
方法二:总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇,混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,室温 12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中,重复步骤12。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)价格关键词:WE0319,IHC抗原修复液,50×,EDTA缓冲液,EDTA Buffer(50×),EDTA缓冲液(IHC抗原修复液,50×)
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文献和实验一、SP 法 1)脱蜡、水化;2)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;3)3% H2O2(80% 甲醇)滴加在 TMA 上,室温静置 10 分钟;4)PBS 洗 2~3 次各 5 分钟;5)抗原修复;6)PBS 洗 2~3 次各5分钟;7)滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8)滴加Ⅰ抗 50μl,室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9)4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10)PBS 洗 3 次各 5 分钟;11)滴加 Ⅱ 抗 40~50 μl,室温
我的石蜡切片又「团灭」了!没关系,专业技术人员与您并肩推塔!
1. 二甲苯脱蜡:3 × 5 min。(为确保测试时二甲苯新鲜,使用新的二甲苯)2. 乙醇水化:100% 乙醇2 × 10 min;95% 乙醇,2 × 10 min。3. 洗涤:切片浸没于ddH2O中,3 ×5 min。抗原修复4. 修复:使用200 mL ddH2O稀释后的SignalStain® EDTA Unmasking Solution#14747进行修复,根据实验室微波炉的实际情况,高火档加热2 min45sec后煮沸,立即换保温档,保温15 min。修复后切片不冷却,直接进行下一步
因素之一,AR液的PH值、浓度、化学成分也是重要的影响因素之一。使用低PH值AR液必须使用阴性对照片,以防止定位不准[9]。Shi等人[10]强调修复缓冲液的PH值对某些抗原的修复十分重要,实验中我们也发现要获得满意结果必须选择抗原修复液的最适PH值。在常规石蜡切片做AR-IHC,采用不同浓度的Alcl3液做AR液,发现4%的Alcl3取得最理想的染色[11]。在修复的抗原中,金属盐可影响蛋白的结构。郑辉等人[12]使用0.01mmol/LPBS、0.01mol/L柠檬酸缓冲液、0.1mol/L Tris
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