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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
miRNA Purification Kit
- 库存:
244
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京miRNA提取试剂盒现货价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京miRNA提取试剂盒现货价格
品牌:百奥莱博
编号:WE0195
英文名:miRNA Purification Kit
产地:国产|进口
本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA, 还可以提取siRNA,snRNA等其他小于200nt的小分子RNA,同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合,独特的裂解液在有效抑制RNases的同时,可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中,如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广,制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| TRIzon Reagent | 60ml |
| Buffer RWT(浓缩液) | 15ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RS及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融,否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
方法一:miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织:将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent,震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞:吸去培养液,加入TRIzon Reagent,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液:离心得到细胞沉淀,弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清:取200μl血浆或血清样本,加入5倍体积TRIzon Reagent,震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使其充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤:4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心5分钟,取上清,转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等,可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿,每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟,样品分为三层:红色有机相,中间层,无色水相,将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇, 混匀,将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,离心后弃掉吸附柱RM,保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇,混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇),12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中,重复步骤13。
方法二:总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇,混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中,请分多次转入。12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中,向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,室温 12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中,重复步骤12。
储存条件:室温(15~30℃)。
想要了解更多关于北京miRNA提取试剂盒现货价格的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·抗GST标签多克隆抗体
编号:WE0345
英文名称:Anti GST-Tag Rabbit Polyclonal Antibody
规格:100μl
该抗体为高纯度的鼠单克隆抗体,与GST结构域具有高亲和性,可灵敏特异地检测各种GST编码载体表达的GST-Tag融合蛋白。
抗体类型:亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原:人工合成多肽
应用范围:WB(1:1000-5000)、ELISA(1:500-10000)
·结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)
编号:WE0118
英文名称:TB Typing Kit(VNTR-9)
规格:50次
本试剂盒是以分子流行病学最新研究进展为基础,经工艺优化后形成的人型结核分枝杆菌基因分型产品。本产品利用结核分枝杆菌基因组中可变数目串联重复序列(variable-number tandem repeats, VNTR)多态性进行基因型分型区分临床菌株,是研究结核分枝杆菌分子流行病学和监测结核病传播状况的有力工具。与现有其它基于VNTR原理的结核分枝杆菌VNTR分型系统相比,这一分型系统对中国流行的菌株具有更强的分辨能力,因此特别适合于中国用户的需求。
通过对各PCR反应引物序列和预混反应液成份进行精心优化,使得本产品具有很强的抗干扰力。与用户自配试剂相比,本产品显著提升了特异条带信号强度,降低了使用粗制模板(煮沸菌液)时非特异条带的出现率,使实验操作更加简便、快捷的同时,提高了检测成功率。本产品的预混反应液化学稳定性良好,能有效抵抗反复冻融(10次)和较长时间(一周)的室温环境,更好地适应了用户检测工作中的灵活性需求。
本产品将人型结核分枝杆菌(MTBC)鉴定、非结核分枝杆菌(MOTT)及模板质量鉴定、结核分枝杆菌北京家族菌株鉴定,和后续的9位点VNTR分型鉴定整合在一个试剂盒中,使用户仅需一个试剂盒、12个PCR反应即可获得待测菌株基因型鉴定所需的完整信息。检测的分辨力指数(Hunter-Gaston index,HGI)可达0.989 。并且,基因型鉴定结果可数字化记录,使得不同样本批次,不同地区,不同时间,不同研究者之间的实验数据可以很方便地进行比对和汇集分析,极大地提高了数据的使用效率。
对鉴定为VNTR-9基因型成簇(所有9个位点具有相同重复数)的样本,若要判定菌株间是否存在近期传播关系,需使用配套产品TB基因分型试剂盒HV-3(货号WE0119),做进一步的分型鉴定。VNTR-9与HV-3两个产品的结合使用可将检测的HGI提升至0.993 。关于TB基因分型试剂盒HV-3(货号WE0119)产品的更多信息请见其产品说明书。
北京miRNA提取试剂盒现货价格关键词:WE0195,miRNA Purification Kit,miRNA提取试剂盒
ARB13785 豚鼠白三烯D4(LTD4)酶标法分析 Guinea pig leukotriene d4,lt-d4 ELISA KIT
ARB13382 牛蛋白酶A(ProteAse A)Elisa分析
CYB167086 兔抗牛IgG
F030227 HRP标记兔抗鸭IgY IgG抗体 Rabbit Anti-Duck IgY*HRP
H1301 大鼠血浆(去红细胞、无菌过滤)
BTN90707 动植物总蛋白微量提取试剂盒 Animal-Plant Total Protein Miniprep Kit
次黄嘌呤 NHS-Biotin 68-94-0
F050316 鸭IgY抗体 Duck IgY
ARB11555 人流行性乙型脑炎抗体IgG(JE IgG)含量检测 Human coronaviruses igG ELISA KIT
PY02-345 含铁琼脂 250克
ARB10428 人戊型肝炎病毒IgM(HEV-IgM)含量测试 Human hepatitis d virus igm,hdv igM ELISA KIT
ARB13519 鱼类超敏C反应蛋白(hs-CRP)尿液中含量检测 Fish high sensitivity c-reactive protein,hs-crp ELISA KIT
PY02-005A 麦康凯琼脂(不含结晶紫) 250克
ARB11801 人雌三醇(E3)Elisa定量检测 Human estriol,e3 ELISA KIT
ARB13278 小鼠雌激素(E)含量检测 Mouse estrogen,e ELISA KIT
北京miRNA提取试剂盒现货价格关键词:WE0195,miRNA Purification Kit,miRNA提取试剂盒
·游离DNA样本保存管(10ml)
编号:WE0398
英文名称:Cell-Free DNA Storage Tube(10ml)
规格:5ml×5支|5ml×50支
游离DNA保存管可直接用于血样的采集与运输,并稳定其中的游离DNA(Cell-Free DNA),是由EDTA抗凝剂和特殊的保护剂组成,能够有效抑制血浆中的核酸酶,并避免血液有核细胞中基因组DNA的释放。该产品适用于无创产前筛查与一些疾病的早期诊断相关的研究。
游离DNA保存管中血液样本可按大多数商业化试剂盒进行游离DNA提取,提取后的游离DNA可应用于下游的检测与分析。同时,该产品也能够用于血液有核细胞中的基因组DNA的保存。
·Ni琼脂糖凝胶
编号:WE0272
英文名称:Ni-Agarose Resin
规格:10ml
该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力,能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点,较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固,有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力,提高纯化效率。较高的基团密度,大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下,对来源于各种表达系统(如杆状病毒,哺乳细胞,酵母以及细菌)中的His标签蛋白,均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子,可直接使用,方便,快捷。
支持物:CL-6B琼脂糖凝胶
载量:20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径:50-160μM
注意事项:
1、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT或EDTA。
2、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
3、为提高纯化效率,首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最佳使用浓度。可以使用线性或梯度浓度的咪唑(20-500 mM)洗脱蛋白,并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
4、为避免柱子被堵塞,请使用高纯度的试剂配制缓冲液,并通过0.45μM过滤器过滤。建议将裂解液进行离心,或者使用0.45μM过滤器过滤。
5、柱再生时,保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、可溶性蛋白纯化缓冲液配方:
| 成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | *化* |
| Soluble Binding Buffer | 20 mM | 10 mM | 0.5 M |
| Soluble Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M |
2、包涵体蛋白纯化缓冲液配方:
| 成分 | Tris-HCl(PH 7.9) | 咪唑 | *化* | 尿素/盐*(代"酸")胍 |
| Inclusion Body Binding Buffer | 20 mM | 5 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
| Inclusion Body Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M | 8 M/6 M |
II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意:
1)填料的上层是乙醇保护层,将填料和乙醇一起混匀,以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算,取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)本实验是通过重力作用使溶液流出,如果溶液不流出,可以给柱子一个外力,例如用大拇指对柱口轻轻按压一下,迫使其流出。
2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后,再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子,平衡结束后即可上样。
注意:柱体积指的是填料的体积。
III 可溶性蛋白的纯化
1、收集菌体后,每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液,超声裂解菌体。10000×g离心10分钟后,收集上清。
2、将上清液过柱,流速为10倍柱体积/小时。
3、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子,收集流穿峰。
4、使用5倍柱体积的Soluble Elution Buffer洗脱,收集洗脱峰。
5、洗脱后,依次使用3倍柱体积的Soluble Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),封柱后2~8℃保存。
Ⅳ 包涵体蛋白的纯化
1、收集菌体后,每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml 细菌裂解液,超声裂解菌体。
2、离心,弃上清,将沉淀重悬于Soluble Binding Buffer 中(如有需要,可进行超声波处理,超声前可加入1-5 mM 磷酸酶抑制剂混合物)。
3、重复操作2,直至包涵体清洗干净(呈较洁净的乳白色状)。
4、将沉淀重悬于Inclusion Body Binding Buffer中,冰浴1小时,使包涵体溶解。
5、10000×g离心20分钟,将上清以孔径为0.45μM的滤膜过滤。
6、将蛋白溶液负载上柱,流速为10倍柱体积/小时。
7、使用15倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer冲洗柱子,收集流穿峰。
8、使用5倍柱体积的Inclusion Body Elution Buffer洗脱,收集洗脱峰。
9、洗脱后,依次使用3倍柱体积的Inclusion Body Binding Buffer和5倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),封柱后2~8℃保存。
注意:在纯化包涵体蛋白时,所有缓冲液均含有变性剂,需要降低Binding Buffer中的咪唑浓度(5 mM或更低)。洗脱时,若蛋白在较高pH下洗脱失败,可以选用低pH缓冲液作为洗脱缓冲液(pH6.5,pH5.9或pH4.5)。
Ⅴ 柱再生
当填料使用多次后,结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色),可以用以下方法再生,提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6M盐*(代"酸")胍冲洗后,使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积100%乙醇冲洗,再依次使用1倍柱体积的75%、50%、25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水,3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、封柱后2~8℃保存。
8、再次使用前,需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗,然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生,3个柱体积的Binding Buffer平衡。
储存条件:2~8℃,避免冷冻
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文献和实验石蜡包埋组织切片 miRNA 提取试剂盒(DP502) 操作指南
以下操作按照天根产品 DP502 石蜡包埋组织切片 miRNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 石蜡切片或石蜡块样本2. 无水乙醇,二甲苯3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头(200 μl ,1 ml); 1.5 ml,2.0 ml 离心管(RNase-free)4. 涡旋振荡器,台式低温离心机,金属浴/水浴本文版权归天根生化科技(北京)有限公司所有,仅供个人学习使用
真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
qPCR 检测后进行功能评估。本研究对血浆外泌体 circLPAR1 可作为 CRC 高灵敏早期诊断标志物提供了新的证据。 qPCR 检测外泌体是强强联手还是无稽之谈? 我们也许会有疑问:外泌体本来就少,提取的 RNA 就更少,后续做 qPCR 检测岂不是难上加难?想知道 qPCR 检测外泌体是否具有合理性,我们需要先了解如何进行这项实验。 实验过程: 1)外泌体提取 包括 Umibio 在内的很多公司都有针对各种不同样本的外泌体提取试剂盒。样本预处理阶段很重要,甚至决定了后续提取外泌体的纯度和量
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