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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻
- 保质期:
长期
- 英文名:
BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)
- 库存:
958
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)价格
品牌:百奥莱博
编号:WE0154
产地:国产|进口
英文名:BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)
规格:1ml|5ml
本品是专用于探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系,浓度为2×,包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+,操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统,在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP,因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前,由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染,大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活,因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶,在常温下没有聚合酶活性,有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合,显著提高了PCR的扩增效率,荧光信号更强,灵敏度更高,可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围,对目的基因定量更准确。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154):
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155):
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156):
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
产品组成:
| 组份 | WE0154-5ml | WE0155-5ml | WE0156-5ml |
| 2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG) | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
| 50×Low ROX | - | 200μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 200μl |
| ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项:
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品,反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃,避光。如果在短期内需要频繁使用,可在2~8℃保存。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG) | 25μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Probe,10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | 2μl | |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果,可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度,与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同,根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。
2、PCR反应程序
注意!本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成!
两步法PCR:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| UNG酶消化 | 37℃/50℃ | 2-10 min | |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 95℃ | 15 s | 35-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min |
注意:
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序,若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法PCR扩增。
三步法PCR:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| UNG酶消化 | 37℃/50℃ | 2-10 min | |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 95℃ | 15 s | 35-40个循环 |
| 退火 | 55℃-65℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 30s |
储存条件:-20℃,避免反复冻融
除BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)价格外,我公司正在打折促销以下产品:
·尿液DNA样本保存管
编号:WE0403
英文名称:Urine DNA Storage Tube
规格:20套
尿液DNA样本采集与常规血液DNA样本采集相比,是一种新型的对人体无伤害、无痛苦的采集DNA样本的方法。尿液DNA样品保存管不仅能够保存尿液中的基因组,还能够保存尿液中游离循环DNA(cfDNA)。因为研究证明血浆cfDNA部分是来自于肿瘤、胎儿和移植器官的,并且血浆游离DNA能够通过肾脏透进入尿液,这就为无创诊断带来极大的应用价值。
尿液DNA样本保存管采集尿液样本之后,能够在6-35℃稳定保存DNA长达7天。尿液DNA样品保存管是由EDTA抗凝剂和特殊的保护剂组成,能够有效抑制尿液中的核酸酶,并避免尿液中脱落细胞基因组DNA的释放,同时也能够用于保存尿液中的血细胞。具有采集方便、无创、常温储存与运输等优点,这就为尿液样本的运输及储存提供了极大的便利。该产品适用于无创产前筛查与一些疾病的早期诊断相关的研究。
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文献和实验aa-dUTP c D N A 纯化 :微 型 洗 脱 柱 ( Qiagen, Crawley, U K ) ,75% ( V / V )乙醇。 ( 3 ) 氨基婦丙基标记的第一链c D N A : Alexa染料號J 自酰亚胺酯(AlexaFluordye555/647,Molecular Probes) 备 用 ( 见注 7 ) ,1 mol/L p H 9 . 0 N a H C 0 3 标记缓冲液,微型洗脱柱 ( Qiagen, Crawley, U K
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