cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)现货供应

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名称：cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)现货供应
产地：国产|进口
编号：WE0234
品牌：百奥莱博
规格：1ml|5ml
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液，试剂体系完整，操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

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·SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料)
编号：WE0134
英文名称：SuperSYBR Mixture(Low ROX)
规格：1ml|5ml
  本品是专用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料、Mg2+和ROX I 校正染料，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。
  本品所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异性的PCR扩增，显著提高了PCR的扩增效率。
  所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，本试剂盒中ROX校正染料含量较较低，适用于ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等需要较低ROX信号校正的荧光定量PCR仪。

试剂盒组成：

 

组份	1ml	5ml
2×SuperSYBR Mixture(Low ROX)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

产品特点
1、本产品中使用了全新高效热启动酶BaldStar Taq DNA Polymerase与独特的PCR缓冲体系，显著提高PCR的扩增效率，具有高灵敏度和特异性强的特点。
2、适用于荧光定量PCR检测，能够准确地对目的基因进行定量和检测。

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有SYBR Green I荧光染料和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
5、配制反应液时，请使用新的或者无污染的枪头和离心管，尽量防止污染。

操作步骤：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR Mixture(Low ROX)	2 5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)推荐反应体系为50μl，也可以根据实际实验需求按比例扩大或者缩小反应体系。

2、PCR反应程序：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

建议采用下表显示的两步法PCR进行程序设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例。若因Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR 扩增，三步法操作步骤详见《反应条件的优化》。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
3)本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

反应条件的优化：
在荧光定量反应条件优化时，应从引物浓度、退火温度、延伸时间等方面进行考虑，以提高反应特异性和扩增效率。
1、反应特异性和扩增效率高的实验体系应具备以下条件：
1)反应特异性高：阴性对照无引物二聚体等非特异性扩增；不产生目的片段以外扩增。
2)扩增效率高：Ct值低；PCR扩增效率高，接近理论值100%。
2、反应条件优化方法：
1)引物浓度：通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。若提高反应特异性，可降低引物浓度；若提高扩增效率，可增加引物的浓度，由此优化反应体系。
2)退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)延伸时间：建议采用两步法PCR，延伸时间1 min进行反应。若提高扩增效率，可尝试将延伸时间增加，或尝试三步法PCR。
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

三步法荧光定量PCR(本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例)：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	10 s	35-40个循环
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度。
3)若需提高反应扩增效率，可适当增加延伸时间。
4)本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)现货供应关键词：cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台),WE0234,NGS Library Quantification Kit for Illumina


·BCA蛋白定量试剂盒
编号：WE0276
英文名称：BCA Protein Assay Kit
规格：500次微孔板(50管次)
  BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000μg/ml。

试剂盒组成：

组成	规格
BCA-A	2×50ml
BCA-B	3ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

保存条件：BSA Standard Solution：2～8℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
2、建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。
3、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释)。
4、如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1)，可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(WE0275)或其他蛋白定量产品。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品最终浓度(μg/μl)
A	0	100	2
B	200	200	1
C	200	200(从B管中取)	0.5
D	200	200(从C管中取)	0.25
E	200	200(从D管中取)	0.125
F	200	200(从E管中取)	0.0625
G	200	0	0(空白)

2、配置BCA工作液：
1)计算BCA工作液总量：
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。
试管检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2ml/每个样本工作液体积=54ml
微孔检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200μl/每个样本工作液体积=5.4ml
2)根据计算出的BCA工作液需要总量，将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比，配制BCA工作液，充分混匀。
注意：
a. 由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。
b. 新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。

3、定量检测
①试管检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)向每个试管中各加入2ml BCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟 ，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
② 微孔检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)每孔加入200μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟，冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用酶标仪在540-590 nm范围内，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：
a. BCA法测定蛋白浓度时，吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。
b. 建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
c. 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
d. 未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
e. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

4、BCA蛋白定量分析结果举例：
微孔板检测法结果

蛋白浓度(μg/μl)	原始吸光值	去除背景值后的吸光值
0	0.086(背景值)	0.000
0.125	0.123	0.037
0.25	0.280	0.194
0.5	0.551	0.465
1	1.068	0.982
2	2.000	1.913

附表1. 干扰物质表
 

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.2M
甘*酸	1M
HEPES	0.1M
MES	50mM
MOPS	50mM
Na+-柠檬酸	＜1mM
PIPES	50mM
磷酸*	0.1M
乙酸*	0.2M pH 5.5
TES	50mM
Tris	0.1M
盐类
硫*(代"酸")铵	干扰
NaCl	1M
尿素	3M
极性化合物
DMSO	5%
甘油	10%
去垢剂和变性剂
Brij35	1%
CHAPS	1%
盐*(代"酸")胍	4M
NP-40	1%
辛葡糖	1%
SDS	1%
Triton X-100	1%
糖类
葡萄糖	10mM
蔗糖	1M
螯合剂
EDTA	10mM
还原剂
β-巯基乙醇	50μM
DTT	1mM
其他
脂类	干扰
HCl/NaOH	0.1M

储存条件：2～8℃


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姬姆萨氏色素 Glutathione Sepharose 4B 51811-82-6
HC0113 透析袋MD34 (  截留量7000  )
ARB11512 人胸腺五肽(TP-5)elisa检测说明书 Human thymopentin,tp-5 ELISA KIT
BTN130663 T4噬菌体基因32蛋白 T4 Gene 32 Protein
ARB12001 大鼠S-100 β蛋白含量分析 Rat soluble protein-100 ELISA KIT
克拉霉素 Potassium pyrophosphate 81103-11-9
BTN111201 痰液DNAOUT Sputum DNAOUT
草酸** Aldehyde Dehydrogenase, potassiu*(代"m")-activated 127-95-7
ARB13209 小鼠高敏三碘甲状腺原*酸(u-T3)elisa检测说明书 Mouse ultrasensitivity tri-iodothyronine,u-t3 ELISA KIT
142-47-2 L-Glutamicacidsodiu*(代"m")salt L-谷*酸*
PY02-156  胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)  250克  
ARB12771 小鼠P物质受体(SP-R)检测服务 Mouse substance p receptor,sp-r ELISA KIT
四丁基*化铵 BTA 1643-19-2
梭菌蛋白酶 Spermine tetrahydrochloride 9028-00-6
BTN101102 改良Lowry法蛋白定量试剂盒 Enhanced Lowry Assay Kit
004001 小牛胸腺DNA 50mg|100mg

北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)现货供应。