细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI)北京

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名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI)北京厂家现货
英文名：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
品牌：百奥莱博
编号：SY0471
产地：国产|进口
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝*酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝*酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝*酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

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·*化乙锭溶液(10 mg/ml)
编号：SY0250
英文名称：EB(10 mg/ml in water)
规格：1ml
本品为10mg/ml的*化乙锭储存液，用于电泳检测时，工作浓度为0.5μg/ml。*化乙锭，英文名Ethidium bromide，缩写EB，一种DNA嵌入剂，可插入DNA/RNA中，其插入双链RNA、双链DNA后荧光强度分别增强21倍、25倍，因此在低浓度（10μg/ml）染色后无需脱色，是分子生物学常用的一种核酸染料、移码诱变剂、DNA/RNA酶抑制剂。*化乙锭已用于核酸的许多荧光分析，还可结合到单链 DNA（虽然强度不高）和三链 DNA 上。另外，EB可与吖啶橙结合用于区分存活的、凋亡和坏死的细胞。

CAS：1239-45-8
分子式：C21H20BrN3
分子量：394.31
外观：红色液体

使用方法

一、胶染法（电泳前染色）
1. 制胶时加入EB 核酸染料使其工作浓度0.5μg/ml（每50mL 琼脂糖溶液中加入2.5μL 10mg/ml EB水溶液）。
2. 按照常规方法进行电泳。

注意事项

1) 此方法比较节省染料，250 μL（10mg/ml）染料大约可以做100块50mL的胶。
2) EB兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
3) 胶染法不适合预制聚丙*(代"烯")酰胺凝胶，对于聚丙*(代"烯")酰胺凝胶请使用泡染法。
4) 在染料的存在下，线状双链DNA的迁移率减小了15%。

二、泡染法（电泳后染色）

1.按照常规方法进行电泳。
2.室温下将电泳后的凝胶在含有EtBr (0.5ug/ml)的电泳缓冲液或水中浸泡30-45min。
3.（可选）对于检测较小量DNA（＜10ng），可将EB染色后的凝胶于水或1mM MgSO4 中室温脱色20min，从而降低因未结合EB引起的背景荧光信号。

储存条件：室温避光，有效期两年。


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