支原体去除试剂1(100X) 细胞生物学试剂

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支原体去除试剂1(100X) 是高品质的细胞生物学试剂产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多支原体去除试剂1(100X)等细胞生物学试剂产品请联系我司咨询订购。

名称：支原体去除试剂1(100X) 细胞生物学试剂
规格：4×1.5ml
编号：SY0543
英文名：Antibiotic Solution 1(100X)
品牌：百奥莱博
在细胞培养过程中，定期检测能够有效的避免支原体大量污染，但如果细胞已受支原体污染，则需对其进行及时处理，最佳处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。若受污染的细胞比较珍贵，必须去除支原体污染，可以通过混合使用抗生素以达到目的。由于支原体无细胞壁，因此传统的抗生素一般对其无效。本品是基于截短侧耳素类衍生物的一种抗生素，与另外一种基于四环素衍生物的抗生素2（SY0544），按先后顺序联合使用，可取得良好的支原体清除效果。

使用方法
注：本品必须与SY0544联合使用才可以达到最佳的支原体清除效果。
1）使用前确保瓶盖密封，解冻至室温，轻轻漩涡混匀并用70%乙醇擦拭瓶子表面，再放到超净工作台上。
2）按先后顺序联合使用SY0543和SY0544处理细胞：
a.受污染的细胞分盘后，每10ml培养基中加入100µl SY0543溶液培养4天，期间需换液时按同等比例加入SY0543溶液。
b.4天后换液，每10ml培养基中加入100µl SY0544溶液培养3天，期间需换液时按同等比例加入SY0544溶液。
3）以上述a，b处理为一个循环，根据实际情况此循环重复2-3次。
4）处理过程中推荐使用PCR支原体检测试剂盒（SY0542）检测支原体去除效果。

储存条件：-20℃避光，有效期18个月

我公司的支原体去除试剂1(100X) 细胞生物学试剂，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
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PY02-284  EC-MUG培养基  100克  
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·细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)
编号：SY0474
英文名称：Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
规格：20 rxn
Annexin V-Alexa Fluor488/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor488标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝*酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝*酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor488 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

试剂盒组份：
Annexin V-Alexa Fluor488————————100 μl
PI Staining Solution (20 μg/ml)————200 μl
4×Binding Buffer————————————4 ml

注意事项
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝*酸与Annexin V-Alexa Fluor488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
5) Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。


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·腔肠素e
编号：SY0241
英文名称：Coelenterazine e
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素e（Coelenterazine e），一种天然腔肠素衍生物，结构上比天然腔肠素多了一个乙基。作为海肾荧光素酶的底物，其荧光强度是天然腔肠素的137%。腔肠素e具有最高的体外水母发光蛋白反应性，且具有双发射峰（405& 465），从而可在pCa 5-7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度，由于该法不依赖于腔肠素浓度，因此提高了检测精确性。但对于细胞内相关实验则无此优势，因为该衍生物的细胞通透性较差。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点：
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。

英文别名：e-CTZ; e Coelenterazine
CAS：114496-02-5
分子式：C28H23N2O3
分子量：449.5
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不溶于DMSO
外观：黄色至橘色固体
纯度：≥95%（TLC）
结构：


注意事项
1） 腔肠素e粉末最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素e氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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