XL10化学感受态细胞厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")XL10化学感受态细胞厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：XL10化学感受态细胞厂家
产地：国产|进口
编号：SY0013
品牌：百奥莱博
规格：100μl×10管
本品为使用大肠杆菌XL10菌株制备的化学转化超级感受态细胞，转化效率超过108 cfu/μg，广泛适用于质粒转化、基因克隆、蓝白斑筛选等用途。

XL10感受态细胞的基因型：Δ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lacTet rHte [F′proAB lacI qZΔM15 Tn10(Tet r) Amy Camr]

产品特性

1）XL10品系，具有四环素(Tetr)和*霉素(Camr)抗性，新型克隆菌株。
2）适合PCR产物、cDNA以及其他来源的非甲基化DNA的高效转化。
3）endA1，RecA1突变，确保外源DNA在宿主菌中的稳定性，有利于高质量质粒DNA提取。
4）Hte基因型，增强大片段DNA转化效率，并使宿主菌细胞生长速度大幅度提高。
5）可用于对重组质粒进行蓝白斑筛选。
6）转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。
7）无外源质粒DNA残留。

储存：-80℃。
组份：
XL10化学感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）请勿将本品置于-20℃或液氮中保存
2）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用。
3）待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
4）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
5）为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔。
6）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
3）将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90秒后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。
4）向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，37℃水浴锅中静置10分钟。
5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
6）2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：也可直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

关于XL10化学感受态细胞厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·Alexa Fluor 594标记驴抗鸡IgY(H+L)
编号：SY0741
英文名称：Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Chicken IgY (H+L)
规格：100μl
本品是由Alexa Fluor 594标记的驴抗鸡IgY（H+L），使用抗原偶联的琼脂糖微珠从驴抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的鸡IgY分子，也会与其他鸡免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括牛、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、小鼠、兔、大鼠和绵羊血清蛋白经过亲和吸附处理，ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应。但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。

Alexa Fluor 594的光谱性质类似于Texas Red，Amax（最大激发波长）为591nm，Emax（最大发射波长）为614nm。本品适合做多标实验，广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学（ICC），流式细胞术（FC）以及免疫组化（IHC）等。

浓度：0.75mg/ml
缓冲液：0.005M 磷酸*，0.125M *化*, pH 7.6
稳定剂：7.5mg/ml BSA（无IgG，蛋白酶），50% 甘油
荧光素：Alexa Fluor 594, Amax=591, Emax=614
防腐剂：0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例：1:50～400（适合多数实验）
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。


XL10化学感受态细胞厂家关键词：XL10 Chemically Competent Cell,SY0013,XL10化学感受态细胞


·NRSF-GFP报告基因质粒
编号：SY0223
英文名称：NRSF (Neuron-Restrictive Silencer Factor) GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
NRSF-GFP报告基因是用于检测NRSF转录活性水平为目的的报告基因。NRSF(Neuron-Restrictive Silencer Factor)又被称作REST(RE1-Silencing Transcription factor)主要是在非神经元细胞中阻遏某些神经性基因的表达。随着研究的深入，发现NRSF-REST在神经发育过程中有着复杂的调控功能。

NRSF-GFP报告基因主要应用于Neuron Silencing Factor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMNRSF-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个NRSF结合位点，可以高效地检测NRSF的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得NRSF-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM NRSF -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMNRSF-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒
编号：SY0501
英文名称：Calcein-AM/PI Double Stain Kit
规格：500T
Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在传统的Calcein（*黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein, AM细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发，仅可观察到死细胞。

本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系，单次就200µl细胞悬液进行染色。

注意事项
1）由于Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，有效期12个月


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·4×Tris-HCl浓缩胶缓冲液,pH6.8
编号：SY0357
规格：250ml
4×Tris-HCl浓缩胶缓冲液中含有0.5 M Tris base, pH为6.8，25 ℃。可用于SDS-PAGE或native PAGE上层胶的配制。本产品不含SDS，如配制SDS-PAGE，需另外添加10%SDS（SY0352），或购买4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液（SY0356）。

Tris英文名称：Tris base；2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol
分子式：C4H11NO3
分子量：121.14。
储存条件：室温。

·双链DNA定量检测试剂盒
编号：SY0260
英文名称：Picogreen dsDNA Assay Kit
规格：2000T
Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义，疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

常用的检测核酸的方法有:1）紫外吸光法（A260），该法操作简便，但DNA样品中核苷酸、单链DNA、RNA和蛋白质对紫外吸收信号影响很大，还容易受到核酸样品中污染物的干扰，不能区分DNA和RNA，而且灵敏度低（ΔA260=0.1相当于5ug/ml的dsDNA）；2）探针杂交法，该法是传统检测微量DNA的常用方法，基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求，但是该法耗时较长，操作繁琐，稳定性、敏感性和特异性较差；3）Hoechst33258染料法，Hoechst33258是一种一定程度上特异于双链DNA的核酸染料，基本不受蛋白质等污染物的干扰，可以检测低至10ng/ml的DNA；在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。

Picogreen dsDNA定量法：Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。

相比传统的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：
①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；
②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；
③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、*仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。
⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

若每次分析体积为2 mL，本试剂盒各组分试剂足够200次分析使用，若使用微孔板或96孔板检测，每次使用量200µl，则各组分试剂足够2000次分析。

产品组份：

 

组分名称	产品编号/规格	保存
dsDNA Quantitation Reagent	100µl×10	2～6℃避光干燥
2×TE buffer	50ml	2～6℃（短期）或-20℃（长期）
Calf thymus DNA standard (100µg/ml)	1ml	2～6℃（短期）或-20℃（长期）

注意事项

1）Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作；
2）尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心。

试剂准备
1）1×TE buffer 的配制：将2×TE 用无菌去离子水（不含Dnase）等体积稀释至1×工作液。
2）PicoGreen工作液的配制：使用前将PicoGreen dsDNA定量试剂回温至室温；PicoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的（共10管）。实验当天，根据实验需求用1×TE按1:200 的比例稀释适量定量试剂浓缩液。例如要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品，可向19.9mL1×TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。
【注】：
a、由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
b、PicoGreen 试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。
c、溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

检测步骤
1、 2µg/ml的Calf thymus DNA standard浓缩液的配制
用1×TE对Calf thymus DNA standard (100µg/ml)进行50倍稀释，即向30µl Calf thymus DNA standard加入1.47ml 1×TE混匀即可。
2、 标准曲线的制备
① 比色皿体系检测---（2ml）
a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和2µg/ml Calf thymus DNA standard，随后加入1ml PicoGreen定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。
【注】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。
 

TE (µl)	2µg/ml Calf thymus DNA standard (µl)	稀释的PicoGreen定量试剂(µl)	Calf thymus DNA standard终浓度
0	1000	1000	1µg/ml
900	100	1000	100ng/ml
990	10	1000	10ng/ml
999	1	1000	1ng/ml
1000	0	1000	blank

表1 比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

b、于荧光仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=480nm/520nm。
【注】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。
c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值，对DNA浓度和荧光值做标准曲线。
② 微孔板体系检测（200µl）
a、按照表2 向96孔板中加入TE和2µg/ml Calf thymus DNA standard，随后加入100µl PicoGreen定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1×TE缓冲液为blank。【注】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。
 

TE (µl)	2µg/ml Calf thymus DNA standard (µl)	稀释的PicoGreen定量试剂(µl)	Calf thymus DNA standard终浓度
0	100	100	1µg/ml
90	10	100	100ng/ml
99	1	100	10ng/ml
99.9	0.1	100	1ng/ml
100	0	100	blank

表1 酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=480nm/520nm。
【注】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。

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