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- HZbscience
- 中国/美国
- HZ-CASP11-8
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Recombinant Caspase 11 (CASP11)
- 库存：
20
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
盒
英文名称：Recombinant Caspase 11 (CASP11)
英文简称：SRSF2IP; SFRS2IP; SIP1; SRRP129; Cysteinyl Aspartate Specific Proteinases 11; Apoptosis-Related Cysteine Peptidase 11; Splicing Factor,Arginine/Serine-Rich 2,Interacting
物种：(Human，人)；(Mouse，小鼠)； (Rat，大鼠)等其它种属。
来源：原核表达
宿主：E.coli
性状：冻干粉
规格：10µg/50µg/200µg/1mg/1g
储存：避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。
应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。
CASP11重组蛋白不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：
真核表达系统的重组蛋白表达步骤：
| a. | 选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293） |
| b. | 表达载体的构建 |
| c. | 无内毒素的质粒抽提 |
| d. | 细胞瞬时转染 |
| e. | 表达小试，条件优化 |
| f. | 表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB） |
| g. | 大量表达 |
| h. | 亲和纯化 |
| i. | 检测和鉴定 |
| a. | 选择表达载体 |
| b. | 密码子优化 |
| c. | 基因合成/亚克隆 |
| d. | 转化表达菌株 |
| e. | 蛋白表达小试分析 |
| f. | 如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化 |
| g. | 如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。 |
| h. | 鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定 |
在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，CASP11重组蛋白除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点，表达水平受密码子喜好程度的影响，也受编码序列中其他目前尚未明了的因素影响。通过改变起始密码子前端的序列，或者在不改变蛋白质序列的条件下利用密码子的简并性改变5’末端编码序列往往有助于解决问题。
通常，两个基因之间的融合表达能更快地解决这些问题。在这种方式中，目的基因被引入某个高表达蛋白序列（fusion tag）的3’末端，比如大肠杆菌的一段序列，或者任一可在大肠杆菌中高度表达的基因，它提供良好表达所必需的信号，而表达出的融合蛋白的N末端含有由fusion tag编码的片段。fusion tag所编码的可能是整个功能蛋白或是其中的部分。比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白等。
H+： 原始的菌株，表达量比较低。
1A1，2D4...3D2，3D8：通过SDS-PAGE鉴定的几个高表达菌株，表达量明显提高。后面的测序结果表明，3D2和3D8的序列一模一样。
CASP11重组蛋白展示的就是H+和3D8的5'端DNA序列的比对：
红框标记的是两条序列不一样的地方，怎么样？就变了几个碱基的序列，表达量就千差万别。这样的例子太多，值得一试！
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文献和实验填料 根据亲和层析的几种应用方向，亲和层析的填料主要分为标签蛋白纯化填料、抗体及抗体片段纯化填料、族特异性亲和填料以及预活化填料四种。 1. 标签蛋白纯化填料 为了简化纯化流程以及方便后期的检测，在进行重组蛋白表达时往往会加入标签。常用的标签包括His标签、GST标签、Strep标签及MBP标签等 （表8)。His标签由于分子量很小，几乎不会影响靶蛋白结构和功能而被广泛使用。GST和MBP标签常用于促进蛋白的可溶表达，尤其对于难表达的真核细胞蛋白和病毒蛋白有很好的促溶表达能力。Strep
Strep-tag®技术是亲和纯化重组蛋白的常用工具，它基于自然界中最强的非共价相互作用之一，即生物素与链霉亲和素的相互作用。该纯化系统的突出特点是纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统，对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助，因此近些年来脱颖而出。 本文将从以下方面介绍Strep-tag®技术： 标签介绍 纯化原理 标签-配体 纯化步骤 系统特点 标签介绍 目前有2种广泛使用的Strep标签： 它们分别是： Strep-tag®II 8 aa小标签(Trp-Ser
293，CHO-S，DG44和CHO-K1细胞，来源于经筛选转染效率更高的亚细胞系。这些细胞也可用于无血清和限定化学成分培养基。重组蛋白的大规模生产一般在稳定转染的悬浮细胞中进行。这些细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白，使用基质珠做为固相支持可以使贴壁细胞悬浮生长。 11转染效率的验证 最有效的验证方式必须是qPCR验证。 荧光观察，使用病毒转染，明白自己病毒的情况，是荧光标记（一般是GFP）还是非荧光标记。质粒转染，可以在载体上添加荧光标记，帮助自己通过荧光观察转染效率。但是荧光并不能完全证明转染
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