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-20℃,避免反复冻
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长期
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509
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
WE0246型2kb DNA Marker厂商的品牌:百奥莱博,是优质的核酸电泳和回收产品,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多2kb DNA Marker等核酸电泳和回收产品请联系我司咨询订购。
名称:WE0246型2kb DNA Marker厂商
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:100次(500μl)|500次(5×500μl)
2 kb DNA Marker由6条DNA片段组成,分别为2000bp、1000bp、750 bp、500 bp、250 bp和100 bp。本产品为已含有1×Loading Buffer的DNA溶液,可取5μl直接电泳,使用十分方便;电泳时750 bp的DNA片段量约为150ng,显示亮带,其他条带的DNA量约为50ng。
注意事项:
1、本产品可直接化冻混匀使用,无需加热。
2、请及时更换电泳缓冲液并使用新制琼脂糖凝胶,以免影响电泳结果。
3、DNA琼脂糖凝胶电泳时,凝胶的纯度对DNA条带的清晰度影响很大,因此尽量选用质量好的琼脂糖,推荐凝胶浓度为1%-2%,电压4-8 v/cm。
4、凝胶浓度与DNA片段的分离性能关系密切。凝胶浓度越大,对短片段DNA分离性能越好;反之,凝胶浓度越小,越有利于长片段DNA的分离。
使用方法:
取5μl 加入琼脂糖凝胶的加样孔中(如果加样孔较宽,大于6mm时,须适当增加上样量),进行电泳。
1%琼脂糖凝胶电泳图(5μl)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期24个月。
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WE0246型2kb DNA Marker厂商关键词:2kb DNA Marker,百奥莱博,WE0246
·DNATrans转染试剂
编号:WE0255
英文名称:DNATrans Transfection Reagent
规格:500μl
DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂,适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率,并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染,基因表达和基因功能研究。
实验前准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用前应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系, 不同实验间应保持一个基本的传代步骤,确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80%-90%,悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×105细胞/ml,用于转染的最佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素,否则会导致细胞死亡。
使用方法:
1、对于大部分的细胞系, DNA与DNATrans Transfection Reagent的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性,实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
a. 贴壁细胞:转化前一天,在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基,并于每孔中接种0.5-2×105个细胞,待细胞长至80%-90%满时进行转染。
b. 悬浮细胞:在细胞转染之前,在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基,并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2、转染当天,首先准备转染复合物,对于每孔细胞按照以下用量配制:
a. 取适量DNA,加入25μl无血清培养基,并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNATrans Transfection Reagent,加入25μl无血清培养基,轻轻混匀,并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后,将稀释的DNA和稀释的DNATrans Transfection Reagent混合(使DNA以及DNATrans Transfection Reagent的终总体积为50μl),轻轻混合均匀,并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状,但不会影响转染效率)。
注意:该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3、将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基,然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24孔板内,轻轻前后推动24孔板以混匀。
4、将细胞置于含5% CO2,37℃条件下培养4-6小时后,更换成500μl生长培养基。
5、18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6、对于稳定的细胞系:在转染24小时后,细胞按照1:10的比例传代,第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注意:
1)该说明为一个24孔的用量,若同时转几个孔,配制转染复合物的量需加倍;若转染其他类型孔板,DNA和DNATrans Transfection Reagent用量见附表,该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基,但由于DNATrans Transfection Reagent具有一定的细胞毒性,作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象,建议更换生长培养基。
3)优化条件:想要得到更高的转染效率,应优化转染条件:培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。
附表:293T细胞转染参考数据
| 培养板 | 每孔表面积 | 铺板用培养基体积 | DNA和稀释体积 | DNATrans Transfection Reagent和稀释体积 |
| 96孔 | 0.3cm2 | 200μl | 0.13μg至10μl | 0.5μl至10μl |
| 24孔 | 2cm2 | 500μl | 0.8μg至25μl | 2μl 至25μl |
| 12孔 | 4cm2 | 1ml | 1.6μg至50μl | 4μl至50μl |
| 35 mm | 10cm2 | 2ml | 4.0μg至100μl | 10μl至100μl |
| 6孔 | 10cm2 | 2ml | 4.0μg至100μl | 10μl至100μl |
| 60 mm | 20cm2 | 5ml | 8.0μg至500μl | 20μl至500μl |
| 10 cm | 60cm2 | 10ml | 24μg至800ml | 60μl至800μl |
储存条件:2~8℃,避光
WE0246型2kb DNA Marker厂商关键词:2kb DNA Marker,百奥莱博,WE0246
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文献和实验1、Marker选择标准(1)应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。(2)所选marker应能清楚反映目标片段的大小,且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时,目的片段和切后载体片段最好能在同一个marker中反映出来,若二者不能兼顾,将前者作为主要考虑要素。2、常见问题分析Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带?A:出现上述情况,可能有以下几个原因:1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;2. 电泳
DL5000 DNA Marker.doc
1.Marker选择标准 (1)应选择在目标片段大小附近ladder较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。 (2)所选marker应能清楚反映目标片段的大小,且次要片段大小也能反映出来。如作酶切鉴定时,目的片段和切后载体片段最好能在同一个marker中反映出来,若二者不能兼顾,将前者作为主要考虑要素。 2.常见问题分析 Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带? A:出现上述情况,可能有以下几个原因:1. marker
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