柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)厂家直销

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柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)厂家直销的品牌：百奥莱博，是优质的DNA纯化产品，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)厂家直销
编号：WE0177
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：Blood Genomic DNA Midi Extraction Kit(1-5ml)
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品采用柱式提取方法，可以处理1-5ml的全血，可纯化获得大小为100bp到50kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer RCL	3×260ml
Buffer GR	25ml
Buffer GL	25ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	50 mg
蛋白酶K 储存液	5ml
吸附柱DL及收集管	50套

保存条件：Buffer RCL 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、本试剂盒最多可以提取1-5ml全血样品，如需提取大量血液样本请选用血液基因组非柱式提取试剂盒(#WE0176)。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请置于56℃水浴重新溶解。
6、如下游实验对RNA污染较敏感，可加入4μl DNase Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。

操作步骤：
1、向离心管(自备)中加入1-5ml血液样品，加入3倍体积的Buffer RCL轻轻涡旋或颠倒混匀。
2、3000 rpm(～900×g)离心10分钟，小心吸弃上清。
3、向沉淀中加入400μl Buffer GR，重悬沉淀。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。
4、1-2ml血液样本提取时,向以上溶液中加入40μl 蛋白酶K ，混匀；2-5ml血液样本提取时,向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
5、加入400μl Buffer GL，颠倒混匀15次，剧烈涡旋震荡至少1分钟。
注意：不要直接将蛋白酶K 直接加入到Buffer GL中。
6、70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：
1)如溶液未彻底清亮，补加适量蛋白酶K ，孵育。延长孵育时间至溶液完全清亮为止。
2)孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
7、加入400μl无水乙醇，颠倒混匀10次。短暂离心，使管壁和管盖上液体集中到管底。
8、将上步所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DL中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤9。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。
11、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温下放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤12所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，12000rpm离心1min；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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·磁珠法血液DNA提取试剂盒
编号：WE0208
英文名称：MagBeads Blood DNA Extraction Kit
规格：96次
  本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的血液DNA提取方法，适用于从新鲜或冷冻抗凝血(柠檬酸盐、EDTA、肝素处理过的血液样品)中提取血液DNA。在离液盐存在时，DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。经两步漂洗以及一步快速漂洗(MW3的快速漂洗对于提高DNA纯度有很大帮助)后，高纯度的DNA被洗脱于EB或去离子水中。DNA得率与样品的类型，储存条件、时间以及样品中白细胞的含量有很大关系。纯化得到的DNA纯度好(260/280的比值在1.7-1.9之间，260/230的比值大于1.5)，完整度高(最高可达50 kb)，可用于克隆，定量PCR，芯片测序等下游反应。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer ML	24ml
Buffer GW1(浓缩液)	80ml
Buffer GW2(浓缩液)	50ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	1ml

自备仪器及试剂：

1、手动单管操提取：
1)恒温混匀仪
2)2/15ml磁力架
3)异丙醇、无水乙醇

2、手动96孔深孔板提取：
1)恒温混匀仪
2)废液抽吸系统
3)手动连续分液器
4)电动连续分液器
5)手动连续分液器分液管(25ml)
6)96孔深孔板磁力架
7)异丙醇、无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、异丙醇与Magbeads混合物的制备(以制备提取10个样品所需量为例)
1)向合适容量(加入异丙醇和Magbeads后总体积小于离心管容积的2/3)的离心管中加入3.3ml【0.3×(10+1)=3.3】的异丙醇。
注意：如用移液器加入异丙醇，需用移液器将枪头在异丙醇吹吸两次后再缓慢吸取异丙醇。
2)向上一步的离心管中加入220μl【20×(10+1)=220】Magbeads
注意：Magbeads加入前需涡旋振荡20秒使其充分混匀，异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡20秒钟使其成为均一的溶液。
3)异丙醇与Magbeads混合物使用前需涡旋振荡10秒钟使其成为均一的溶液。
3、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
4、样品应避免反复冻融，否则会导致提取得到的DNA片段较小且提取得率低。
5、次使用前应按试剂瓶标签在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
6、如Buffer ML中出现沉淀，请在56℃水浴锅中重新溶解，摇匀后即可使用。
7、实验过程中，磁珠在溶液中的充分混匀对于提取的得率与纯度都有很大的影响。实验过程中务必使磁珠与溶液充分混匀。不同厂家生产的恒温混匀仪震荡混匀效果有一定差异，实验过程中请注意观察磁珠状态。如出现磁珠贴壁等未充分混匀的现象，请用移液器吹吸混匀或调整震荡频率。

操作步骤：

一、手动单管操作：
1、向1.5ml的离心管中加入20μl 蛋白酶K ，之后加入200μl的血液。
注意：
1)冷冻抗凝血液需提前在室温(15～30℃)下放置，融化混匀。
2)如血液体积大于或小于200μl，蛋白酶K 、Buffer ML和异丙醇与磁珠混合物的用量需按比例调整。
2、向离心管中加入200μl Buffer ML，涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后，将离心管放于56℃水浴锅中孵育15分钟，期间涡旋震荡混匀2次。
3、将离心管从水浴锅中取出，短暂离心后室温放置5分钟。加入彻底混匀的320μl异丙醇与Magbeads混合物，涡旋震荡混匀5秒钟后将离心管放于25℃、1600 rpm的恒温混匀
仪上震荡混匀5分钟或将离心管连续颠倒混匀10分钟。
4、将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
5、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
6、重复步骤5。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1分钟或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
8、重复步骤7。
9、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管侧壁上有液珠，可向离心管中加入750μl无水乙醇。盖盖后颠倒离心管(保持离心管固定于磁力架上)，之后彻底弃去无水乙醇。
10、将离心管从磁力架上取下，加入50-200μl Buffer EB。涡旋震荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟，或将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
11、将离心管放于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

二、手动96孔板操作：
1、向2ml 96孔深孔板(简称“深孔板”)中加入20μl 蛋白酶K ，之后加入200μl血液，并记录每孔中所加血液名称。
注意：
1)可将蛋白酶K 预先分装于8连管中，每管加入260μl。之后，用8通道移液器将蛋白酶K 分装于96孔深孔板中。
2)血液需加到96孔深孔板的底部，避免血液触碰到孔的上部。
2．向深孔板中用电动连续分液器或8通道移液器加入200μl Buffer ML。
3．将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀2分钟，盖上硅胶盖后将深孔板放于56℃水浴锅中孵育15分钟，之后再将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
4、将深孔板从恒温混匀仪上取下，用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板中加入彻底混匀的320μl Magbeads与异丙醇混合物。盖上硅胶盖后，立即将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀5分钟。
5、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
注意：用废液抽吸系统去除溶液时需将真空泵调节至较小的负压力值，使溶液以一个合适的速度被吸走,速度过快会造成磁珠的丢失。
6、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
7、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
8、重复步骤6-7。
9、用手动连续分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前检查是否已加入无水乙醇)，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀3分钟。
10、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
11、重复步骤9-10。
12、用手动连续分液器向96孔深孔板中加入500μl无水乙醇，之后将深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀1分钟。
13、将板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟。用废液抽吸系统或8通道移液器弃去溶液，期间避免枪头接触磁珠。
14、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，将深孔板倒置于干净的吸水纸上放置2分钟。之后将深孔板从96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒温混匀仪上静置5分钟。
15、用电动连续分液器或8通道移液器向深孔板加入100-200μl Buffer EB，之后将深孔板放于100℃(因该恒温混匀仪为悬空加热，洗脱液实际温度在50-60℃之间)、1600 rpm的恒温混匀仪上震荡混匀10分钟。
16、将深孔板从恒温混匀仪上取下后放于96孔板磁力架上静置2分钟，用8通道移液器溶液转移至96孔PCR板中盖盖后-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)


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·蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物
编号：WE0256
英文名称：Phosphatase Inhibitor Cocktail(100×)
规格：1ml
  组织和细胞在裂解过程中会释放大量内源性蛋白*(代"磷")酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白去磷酸化。本产品含四种广谱的磷酸酶抑制剂混合物，可有效抑制丝*酸/苏*酸磷酸酶、蛋白酪*酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。该混合物为100倍浓缩水溶液，可直接加入任何组织类型和细胞的裂解产物中，均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化，从而维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。

使用方法：
取出实验所需蛋白抽提试剂进行预冷，按照1:99比例加入Phosphatase Inhibitor Cocktail(例如990μl抽提试剂中加入10μl Phosphatase Inhibitor Cocktail)，使其在抽提试剂中成1×工作液。

储存条件：2～8℃

·Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
编号：WE0325
英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
规格：50次
  本试剂盒是一种采用Annexin V-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
  细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝*酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色， 因此通常将Annexin V与PI配合染色， 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

试剂盒组成：

组份	50次
4×Binding Buffer	10ml
Propidium Iodide，PI	500μl
Annexin V-FITC	250μl

注意事项：
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS和去离子水。
3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性，请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：
1、细胞样品的准备：

a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2、用去离子水按 1:3 稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为 1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。

实验图例


储存条件：2～8℃，避光保存

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