北京Bradford蛋白定量试剂盒厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京Bradford蛋白定量试剂盒厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Bradford蛋白定量试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：北京Bradford蛋白定量试剂盒厂家
英文名：Ultra Bradford Protein Assay Kit
品牌：百奥莱博
编号：WE0275
产地：国产|进口
  Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良，最大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。

试剂盒组成：

 

组成	规格
Bradford Protein Assay Reagent	2×100ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

注意事项：
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
 

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品最终浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	50	150	1500
C	200	200	1000
D	200	200(从C管中取)	500
E	200	200(从D管中取)	250
F	200	200(从E管中取)	125
G	200	0	0(空白)

2、试管检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

3、微孔检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

附表1. 干扰物质表

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.6M
甘*酸	0.1M
HEPES	0.1M
MES	0.7M
MOPS	0.2M
Na+-柠檬酸	50mM
PIPES	500mM
磷酸*/磷酸*	1M
乙酸*	0.6M
Tris	2M
盐类
硫*(代"酸")铵	1M
NaCl	1M
尿素	6M
极性化合物
甘油	99%
还原剂
β-巯基乙醇	1M
DTT	1M
去垢剂和变性剂
Brij35	干扰
脱氧胆酸纳	0.25%
CHAPS	1%
NP-40	干扰
辛葡糖	2%
SDS	0.1%
Tween-20	干扰
Triton X-100	0.1%
糖类
蔗糖	1mM
螯合剂
EDTA	100mM
EGTA	50mM
其他
HCl	0.1M
NaOH	0.1M
NAD	1mM
*	5%

储存条件：2～8℃

更多有关北京Bradford蛋白定量试剂盒厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·人类cDNA
编号：WE0227
英文名称：Human Placenta cDNA
规格：100μl(20次反应)
  本产品是以人胎盘组织RNA为模板，Oligo(dT)以及Random为引物, 用百奥莱博的高灵敏度的逆转录酶反转录得到的PCR即用型cDNA，可用于PCR实验的阳性对照。纯度：OD260/280≈1.8

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：

试剂	50μl体系	终浓度
10×Taq PCR Buffer with Mg2+	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Human Placenta cDNA	5μl
Taq DNA Polymerase，2.5 U/μl	0.5μl
RNase-Free Water	补水至50μl

注意：
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的10×PCR Buffer中已经含有15 mM*离子，可根据丌同的引物对和模板来调节*离子浓度，由此优化反应体系。

2、将混合好的液体进行PCR反应。
3、结果检测：反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


北京Bradford蛋白定量试剂盒厂家关键词：Bradford蛋白定量试剂盒,WE0275,Ultra Bradford Protein Assay Kit


·SuperSYBR Mixture(不含ROX校正染料)
编号：WE0136
英文名称：SuperSYBR Mixture
规格：1ml|5ml
  本品是专用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料和Mg2+，操作简单。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。
  本品所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异性的PCR扩增，显著提高了PCR的扩增效率。该产品适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪，如：Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96。

试剂盒组成：

组份	1ml	5ml
2×SuperSYBR Mixture	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

产品特点
1、本产品中使用了全新高效热启动酶BaldStar Taq DNA Polymerase与独特的PCR缓冲体系，显著提高PCR的扩增效率，具有高灵敏度和特异性强的特点。
2、适用于荧光定量PCR检测，能够准确地对目的基因进行定量和检测。

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有SYBR Green I荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
5、配制反应液时，请使用新的或者无污染的枪头和离心管，尽量防止污染。

操作步骤：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR Mixture	2 5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)推荐反应体系为50μl，也可以根据实际实验需求按比例扩大或者缩小反应体系。

2、PCR反应程序：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

建议采用下表显示的两步法PCR进行程序设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例。若因Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR 扩增，三步法操作步骤详见《反应条件的优化》。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
3)本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

反应条件的优化：
在荧光定量反应条件优化时，应从引物浓度、退火温度、延伸时间等方面进行考虑，以提高反应特异性和扩增效率。
1、反应特异性和扩增效率高的实验体系应具备以下条件：
1)反应特异性高：阴性对照无引物二聚体等非特异性扩增；不产生目的片段以外扩增。
2)扩增效率高：Ct值低；PCR扩增效率高，接近理论值100%。
2、反应条件优化方法：
1)引物浓度：通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。若提高反应特异性，可降低引物浓度；若提高扩增效率，可增加引物的浓度，由此优化反应体系。
2)退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)延伸时间：建议采用两步法PCR，延伸时间1 min进行反应。若提高扩增效率，可尝试将延伸时间增加，或尝试三步法PCR。
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

三步法荧光定量PCR(本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例)：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	10 s	35-40个循环
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度。
3)若需提高反应扩增效率，可适当增加延伸时间。
4)本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


北京Bradford蛋白定量试剂盒厂家关键词：Bradford蛋白定量试剂盒,WE0275,Ultra Bradford Protein Assay Kit

SJ0454 Propylthiouracil 丙基硫氧嘧啶
DN1101 细菌基因组DNA快速提取试剂盒
BL0625 *甲脒-琼脂糖凝胶6B Benzamidine Sepharose 6B
PY02-268B  哥伦比亚血琼脂培养基基础  250克  
H0701 山羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
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ARB14061 鲑鱼补体蛋白4(C4)Elisa分析 Fish c4 ELISA KIT
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002002 无菌脱纤维兔血
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ARB11271 人骨保护素(OPG)定量分析 Human osteoprotegerin,opg ELISA KIT

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