Hoechst 33342 染色液(即用型)说明书

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名称：Hoechst 33342 染色液(即用型)说明书
产地：国产|进口
规格：10ml|50mL
编号：QN1322
英文名：Hoechst 33342 Stain solution(ready-to-use)
本Hoechst 33342染色液为即用型，可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。

使用说明：

1. 对于固定的细胞或组织：
a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：
a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。
b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项：
1、荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

欲咨询购买Hoechst 33342 染色液(即用型)说明书，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·羧肽酶B
编号：QN0418
英文名称：CPB
规格：1mg
CAS号：9025-24-5
储存条件：−20℃
酶活：180U/mg protein

·索拉非尼
编号：QN0146
英文名称：Sorafenib tosylate
规格：100mg
本品通常用于科研实验用免疫抑制剂。

别名：对甲*磺酸索拉非尼;索拉菲尼;索拉非尼碱;索拉替尼;索拉菲尼碱
CAS号：284461-73-0
分子式：C21H16ClF3N4O3
分子量：464.83
储存条件：-20℃

·β-甘油磷酸二*盐
编号：QN0725
英文名称：β-Glycerol phosphate disodiu*(代"m") salt pentahydrate
规格：10g
本品常用作小牛肌醇-1－磷酸酶的底物，测定磷酸酶的含量。

别名：β-甘油磷酸*
CAS号：819-83-0或154804-51-0
分子式：C3H7Na2O6P·5H2O
分子量：306.12
纯度：≥98%
性状：淡黄色或白色结晶粉末
储存条件：2～8℃

·鲑鱼精DNA
编号：QN0558
英文名称：Deoxyribonucleic acid sodiu*(代"m") salt from salmon testes
规格：100mg
别名：smDNA
CAS号：68938-01-2
性状：白色线状
溶解性：溶于水，参考浓度2mg/ml
来源：鲑鱼睾丸
储存条件：2～8℃

·抗荧光衰减封片剂
编号：QN1270
英文名称：Mounting Medium, antifading
规格：5ml|25ml|100ml
抗荧光衰减封片剂是一种用于减缓荧光衰减的封片试剂。以甘油为基础，加入抗荧光衰减剂，有强烈的抗荧光衰减作用，用于对荧光组织和细胞样品的封片。封片后，样品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。本试剂操作简单，在封片时用移液枪滴一滴抗荧光衰减封片液，盖上盖玻片就可以了。

使用说明：
1. 贴壁细胞样品：
A. 染色完毕后，吸尽液体。
B. 滴一滴抗荧光衰减封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。
C. 随后即可通过荧光显微镜观察样品。

2. 组织切片：
A. 染色完毕后，吸尽液体。
B. 滴一滴抗荧光衰减封片液于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。
C. 随后即可通过荧光显微镜观察样品。3. 其它样品：其它样品参考细胞样品或组织切片进行操作。

注意事项：
1. 荧光物质均易发生衰减，染色后的样品宜避光保存。
2. 在使用抗衰减封片液的情况下可以减缓衰减，但仍宜尽量避光。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：2～8℃，有效期一年


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·SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色)
编号：QN1229
英文名称：SABC(Rabbit IgG)-POD Kit
规格：100T
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验，DAB显色。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10mL
3% H2O2-—————————————10mL
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100μL
SABC-POD浓缩液——————————100μL
稀释液——————————————30mL
20×DAB显色液A——————————1mL
20×DAB显色液B——————————1mL

ABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物，大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片为例)
1、切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2、3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次。
3、可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸*缓冲液(pH 6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH 7.2-7.6)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃放置10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。

4、滴加5% BSA封闭液，室温20分钟，甩去多余液体, 免洗。
5、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 孵育2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6、根据用量，用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1mL稀释液加入10-20μL Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。 滴加Bio-羊抗兔IgG工作液， 20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
7、根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL SABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
8、DAB显色：根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1mL PBS加入50μL 20×DAB显色液A，加入50μL 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上，室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9、苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。


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·L-乳酸脱*酶
编号：QN0484
英文名称：L-Lactic Dehydrogenase
规格：2.5KU
本L-乳酸脱*酶常用于检定丙*(代"酮")酸盐。

别名：L-LDH
CAS号：9001-60-9
分子量：140kDa(由四个亚基组成)
性状：类白色冻干粉或硫*(代"酸")铵的结晶悬浮液
类型：Type II
酶活性：≥300U/mg
pI：8.4～8.6
最适pH：7.5
储存条件：2～8℃

单位定义：37℃，pH 7.5，每分钟将1.0 μmol 丙*(代"酮")酸还原成L-乳酸的酶量为1单位。

·多粘菌素E硫*(代"酸")盐
编号：QN0049
英文名称：Colistin Sulphate
规格：1g|5g
CAS：1264-72-8
分子式：2(C52H98N16O13).5(H2SO4)
分子量：2801.27
储存条件：2～8℃

·杀稻瘟菌素S
编号：QN0028
英文名称：Blasticidin S
规格：10mg|100mg
Blasticidin S是一种来自Streptomyces griseochromogenes的核苷类抗生素，通过干扰核糖体中肽键的形成来特异性地抑制原核和真核生物的蛋白质合成。Blasticidin S用于筛选携带有bsr或BSD耐受基因的转染细胞。杀稻瘟菌素具有快速而强效的作用模式，很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。

CAS：3513-03-9
分子式：C17H27CIN8O5
分子量：458.9
纯度：＞95%(HPLC)
储存条件：-20℃
别名：灭稻瘟素

抗性基因：
目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种，一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基转移酶基因bls，另外两种是脱*酶基因，包括从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是最常用的筛选标志，用于哺乳动物和植物细胞的基因转移实验，也可用于E.Coli。

应用浓度：
1)Escherichia coli
E. coli对Blasticidin S的敏感性稍差，但是转化子对Blasticidin S具有耐受性，可以用低盐LB培养基(pH 8)进行筛选，浓度范围为50-100 μg/ml Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。
2)哺乳动物细胞
哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 μg/ml。初次实验建议通过灭杀曲线来确定最佳使用浓度。
- 25-100 µg/ml in bacteria
- 1-30 µg/ml in mammalian cells
操作步骤(哺乳动物稳转株筛选)
Blasticidin S通常使用浓度为10 μg/ml。携带bsr或BSD基因的质粒转染到细胞中，在含有Blasticidin S的正常生长培养基中孵育，用于筛选稳定转染细胞株。
(1)转染后48h，用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代(注：细胞处于活跃分裂期时抗生素工作最好。细胞密度太高，抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率最好不超过25%);
(2)每3-4天去除培养基，加入含抗生素的新鲜培养基;
(3)7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率，集落形成可能需要增加一周或更久。
(4)转移5-10个耐受克隆到35mm细胞盘中，加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。

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