SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显

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北京百奥莱博供应的SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色)现货用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色)现货
英文名：SABC(Mouse IgG)- FITC(POD) Kit
编号：QN1220
规格：100T-200T
产地：国产|进口
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG来源的免疫组化实验.提供DAB及FITC两种显色选项。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)—————————————10ml
Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液-—————————100ul
SABC-FITC浓缩液-————————————100ul
SABC-POD浓缩液—————————————100ul
稀释液—————————————————30ml
20×DAB显色液A—————————————1ml
20×DAB显色液B—————————————1ml
抗荧光衰减封片剂————————————10ml

操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1、切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC，可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2、热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)，电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3、滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5、根据使用量，用稀释液将bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。
6、根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
7、滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
9、DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片：常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2(如果用FITC，刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次，下接上面第4步。
对于冰冻切片：固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：
1、如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2、如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。
3、因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

储存条件：-20℃

关于SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色)现货的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
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·DiI标记乙酰化低密度脂蛋白
编号：QN0290
英文名称：DiI-Ac-LDL
规格：500μg
本品DiI-Ac-LDL是1,1’-双十八酯基-3,3,3,,3,四甲基-吲哚碳菁高*酸盐标记的乙酰化低密度脂蛋白。它能用于鉴定和分离混合细胞群中的血管内皮细胞和巨噬细胞。当细胞被DiI-Ac-LDL标记后，脂蛋白就会被溶酶体酶降解并且DiI(荧光探针)会积累在细胞内膜中。标记了DiI-Ac-LDL的细胞生存活性不受影响。血管内皮细胞纯化培养物可以基于增加的代谢DiI-Ac-LDL利用荧光激活分类从复杂的初级培养物中进行分离。污染细胞(成纤维细胞、平滑肌细胞、周细胞、上皮细胞)将不会被标记。巨噬细胞能够从混合的细胞群中(包括血管内壁细胞)区分出来是因为它的标记更亮一些。

标记有DiI-Ac-LDL的内皮细胞较其它抗原标记的内皮细胞有较多的优势。一旦细胞被标记， 荧光探针(DiI)将不会被胰蛋白酶移除掉。低密度和汇合培养的血管内皮细胞都将被高效的标记。其它类型的细胞标记水平均达不到血管内皮细胞标记(除了巨噬细胞)。百奥莱博公司DiI-Ac-LDL均通过牛主动脉内皮细胞和小鼠巨噬细胞进行标记测验以确保结果的一致性。

实验步骤：
1. 在生长培养基中将DiI-Ac-LDL稀释至20-50ug/ml;
2. 将其加入到细胞中37 ºC温育4小时;
3. 去掉培养基;
4. 用无探针的缓冲液冲洗;
5. 通过荧光显微镜观察并/或者将细胞通过胰蛋白酶(或者EDTA)进行分类。
6. 荧光显微镜：用标准罗丹明激发进行观察 (或者建议用波长激发：549nm、发射：565nm)。如果需要，用3%甲醛在PBS中固定。切勿使用甲醇或丙*(代"酮")进行固定，因为DiI溶于有机溶剂。(仅供科研使用)

注意事项：长时间的储存后可能会产生沉淀，这种现象属于正常情况。溶液放入离心管中离心2分钟将沉淀除去即可。DiI-Ac-LDL不稳定，实验时最好现用现配，采用新鲜配置工作液。

储存条件：2～8℃避光保存，请勿冷冻


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·磷酸化蛋白提取试剂盒
编号：QN1067
规格：50T|100T
磷酸化蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为强烈，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。

操作方法:
1、组织总蛋白的提取
(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀，放置在冰上备用;
(2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作;
(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
(1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml;
(2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液;
(3)在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，
(4)将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20～30min;
(5)悬浮细胞：4℃400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，
涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3-4次;
(6)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min;
(7)将上清移入新的EP管中;
(8)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

注意事项：
(1)实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境;
(2)PSMF(有毒)现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解。

储存条件：-20℃

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