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eECL Western Blot Kit
951
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒 蛋白质研究,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒 蛋白质研究
品牌:百奥莱博
编号:WE0308
产地:国产|进口
规格:50ml|250ml
高灵敏度化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的高灵敏增强型检测试剂盒。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成,在HRP的催化下产生高强度的信号,能够检测pg级别的抗原。灵敏度高、发光信号强烈持久,可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
试剂盒组成:
组成 | 50ml | 250ml |
eECL-A(Luminol Enhancer) | 25ml | 125ml |
eECL-B(Peroxide) | 25ml | 125ml |
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
胶片反相(白色条带,黑色背景) | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
膜上出现棕色或黄色条带 | ||
暗室中看到强烈发光 | ||
发光信号持续时间过短 | ||
信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP 过多,消 耗底物过快,引起信号迅速降低 |
稀释HRP标记物至少10倍以上 |
抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 | |
蛋白转移率低 | 优化转移系统 | |
高背景 | 系统中HRP 过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
封闭不足 | 优化封闭程序 | |
封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 | |
冲洗不充分 | 增加冲洗时间,次数 | |
曝光过度 | 减少曝光时间 | |
抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 | |
蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
膜未平衡 | 按照说明书处理膜 | |
胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 | |
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短) |
系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常) |
一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
SDS 导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
组份 | WE0141-5ml | WE0142-5ml | WE0143-5ml |
2×BaFaSYBR Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
50×Low ROX | - | 200μl | - |
50×High ROX | - | - | 200μl |
ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×BaFaSYBR Mixture | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | 2μl | |
50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
ddH2O | up to 50μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 20 s | |
变性 | 95℃ | 3 s | 35-40个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 30 s | |
融解曲线分析 | 95℃ | 15 s | |
60℃ | 1 min | ||
95℃ | 15 s | ||
60℃ | 15 s |
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