一步法快速WB试剂盒(兔源一抗) 蛋白质研究

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一步法快速WB试剂盒(兔源一抗) 蛋白质研究的品牌：百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)
品牌：百奥莱博
英文名：One Step Western Kit HRP(Rabbit)
产地：国产|进口
规格：50次
  本试剂盒是百奥莱博最新研发的Western Blot检测试剂盒，能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次(每次5 min)后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。

组份	50次
Blocking Buffer	500ml
Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)	5×1ml
Dilution Buffer	500ml
Wash Buffer(10×)	500ml

注意事项：
1、客户需自己准备兔来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2～8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2～8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2～8℃保存，避免冻融。

操作步骤：
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5cm×8cm 膜为例：

1、漂洗液准备：取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml，即为1×Wash Buffer，待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭：转膜完成后，将膜浸没到10ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。
3、漂洗：倒掉封闭液，加入8-10ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到离心管中，加入兔源一抗3-10μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中，充分混匀。
注意：
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100μl抗体反应液HRP(兔)到EP管中，加入10μl一抗，加入到10ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面)，在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。

应用实例：


实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A：普通WB对照：beta-actin兔多抗 3.3ug 室温孵育40min，洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1：10000稀释，室温40min，ECL(WE0308)曝光


实例二 抗原为293T细胞全裂解液
C：普通WB对照：PAK1，Epitomics兔单抗1：1000 室温孵育40min，洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1：10000稀释，室温40min，ECL(WE0308)曝光
D：一步法WB： Epitomics兔单抗1：1000 室温孵育40min，ECL(WE0308)曝光。

常见问题及解决方法：

问题	可能原因	解决方案
信号太弱或者 看不到条带	蛋白上样量太少	进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。
	蛋白转膜效率太低	优化转膜时间或者电流，确保转膜时膜与胶之间没有气泡。
	一抗亲和力较低	增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号
	一抗亲和力较低	对于低亲和力抗体来说，减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟，减少到每次5分钟可以增加信号。
背景偏高	一抗使用过量	减少一抗的使用量。
	一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应	使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。
	洗膜时间太短	增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。
	曝光显影时间过长	减少曝光时间。如果信号和背景都高，可以等待一段时间 ，等背景信号减弱后，再进行曝光。
	容器或者试剂被污染	每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套，使用清洁的镊子处理膜。

储存条件：2～8℃保存，避免冷冻
关键词：兔源一抗,一步法快速WB试剂盒(兔源一抗),WE0298,One Step Western Kit HRP(Rabbit)


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编号	名称
WE0211	6×UltraStain上样缓冲液
WE0227	人类cDNA
WE0158	miRNA荧光定量检测试剂盒
WE0244	100bp DNA Ladder
WE0241	二代测序接头引物试剂盒(Illumina平台 Index Primer1-12)
WE0235	双链DNA荧光定量试剂盒
WE0351	抗His标签多克隆抗体
WE0197	血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
WE0177	柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)
WE0268	Protein A+G琼脂糖凝胶
WE0213	DNase I(不含RNase)
WE0395	口腔拭子DNA样本保存管
WE0330	抗His标签抗体琼脂糖介质
WE0124	高效多重PCR Mix
WE0271	Protein A琼脂糖凝胶
WE0349	抗HA标签单克隆抗体
WE0170	DNA产物快速纯化试剂盒
WE0302	定影粉
WE0304	蛋白印迹膜再生液
WE0218	红细胞裂解液
WE0222	无毒RNA酶清除剂
WE0312	PBS(pH7.5,10×)
WE0324	BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC)
WE0240	二代测序接头引物试剂盒(Illumina平台 Index Primer13-24)
WE0214	溶菌酶
WE0382	RRX标记山羊抗兔IgG(H+L)
WE0342	HRP标记抗GST标签多克隆抗体
WE0116	2×富含GC PCR MasterMix
WE0144	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)
WE0184	唾液基因组DNA提取试剂盒
WE0373	FITC标记山羊抗大鼠IgG(H+L)
WE0285	0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH6.8)
WE0123	高效热启动DNA聚合酶
WE0359	FITC标记兔抗人IgG(H+L)
WE0210	UltraStain核酸染料