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- 2025年07月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
12个月
- 库存：
100
- 供应商：
柯雷生物
- 规格：
50ug
宿主：E.coli
内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)
亚细胞定位n/a
片段与标签：N-terminal His Tag
缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性状：冻干粉
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文献和实验【转帖】教你一种简单、高效的提高重组蛋白质的诱导表达量的方法
表达量越低，但是可溶的比例一般来说会越高，所以如果追求表达量可以尝试37℃或者42℃（没试过42℃）；诱导时间，这个跟培养基成分及供氧情况很有关系，如果供氧不足/营养不够，提高时间会起到反效果。 综合而言，我一般用的重组蛋白诱导表达条件是固定的，有时候要追求可溶表达，顶多就调整下诱导温度（25℃）。条件就是：自动诱导培养基（不用额外的IPTG），37℃，20h。一般来说大分部蛋白的表达量都还可以。 但有些蛋白的表达量不行，或者某些蛋白需要长期大量使用，因此提高这些重组蛋白的诱导表达量就十分
一. 实验目的1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法。2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白。二. 实验原理将目的基因连接在表达载体后，通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外，在终止子前有6个His编码序列，便于蛋白的亲和层析纯化。亲和层析以蛋白质或生物大分子和结合在介质上的配基间的特异亲和力为基础。本实验采用磁座和结合有Ni2+的磁珠在变性或非变性条件下对融合蛋白进行分离纯化，只需通过“结合-清洗-洗脱”三个简单的操作步骤就可完成。该系统可根据样本量灵活
成分。5.优化表达条件（1）重组蛋白不表达或者表达量低。如果重组蛋白不表达（包含体和可溶蛋白都没有）通过改变诱导剂浓度，诱导温度，时间等都不表达的时候，然后尝试更换菌株、质粒载体。降低诱导后培养温度。重组蛋白表达得越慢，其折叠效果就越好，大肠杆菌在4℃时依然可以表达重组蛋白，而将培养温度降低至25-30℃就能显著改善蛋白折叠。此方法不适用于温度诱导的重组蛋白表达；减少诱导剂。诱导剂浓度可以降低至1/10；选用Lac渗透酶缺陷型菌株，如Tuner、Rosetta等，也有很好的效果。这类菌株能够使进入每个细胞
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