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上海研谨生物
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文献和实验一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化,不同点如下: 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理,封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育,孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油:0.01M PBS (1:1)。条件许可,建议购买抗淬灭的封片液,使标本可以保存更久。 5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多,需要分别设定阳性和阴性
实验目的: 通过 Aco600 染料标记外泌体,并与受体细胞共孵育,通过激光共聚焦显微镜观察外泌体被靶细胞的摄取情况。 实验材料: 外泌体红色荧光标记染料 Aco600(Umibio UR52423) Exosome 来自 MCF 细胞无血清培养基(Umibio,UR51102)条件下获得,通过超速离心方式获得。(也可直接采购 Umibio 的成品外泌体) Aco600-Exosome:24 孔板每孔外泌体总颗粒数: 1×1010 个(5×109-1×1010),外泌体体积 100-300ul
实验流程:多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上,随后即可衔接下一轮单标染色,直至全部标记完成,即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合:1)新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2)梯度乙醇浸片,100% 5min;95% 5min;70% 2min。3)灭菌水洗片1min,重复3次。4)10%中性福尔马林浸片10min,灭菌水洗片1min,重复3次。2.微波修复:1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中,用抗原
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