双嘧达莫CAS : 58-32-2

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

CRISPR/Cas9 基因敲除实验 | 如何确定目标基因？

。在开始之前仍需要确认的信息在大数据筛选+文献确认之后，就要开始着手敲除事项，在这之前有一个非常重要的点在很多教程中都没有提及，包括我之前写的 sgRNA 设计推文 CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计常规情况下：敲除所有 isoform 都有的基因片段，以达到全敲的效果；在保证敲除所有 isoform 的基因片段之后，尽量敲往前一点，以免太过后面，导致后半部分虽然不完整，但仍有功能；来自我的好友喜糖的提醒，作为大段敲除，最好是之前敲掉是 3 的倍数的外显子，以达到移码的效果，使得该位点之后

Cell：诺奖得主新作！在大量病毒中发现微型 CRISPR 系统，可高效编辑人类和植物基因组

效率。在拟南芥中，Casλ 在内源性 PDS3 基因上表现出高达 18% 的编辑效率，显著高于 CasΦ 的效率，且编辑的效率高度依赖于温度，在 23℃ 没有发生编辑，在 32℃ 发生最高水平的编辑。此外，Casλ 还能够编辑六倍体小麦（比人类基因组大 5 倍的基因组）原生质体中的内源性抗病基因 Snn5。 Casλ RNPs 编辑人类，拟南芥和小麦细胞的内源基因。来源：Cell 通过低温电子显微镜测定，研究人员发现 Casλ-crRNA-dsDNA 复合物呈现出一个紧凑的双叶结构，类似于 Cas