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- KALANG
- 中国/美国
- K230
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
−20℃恒温保存一年
- 保质期：
1年
- 英文名：
EZ-Blunt™ Blunt-end Ligation Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
ml/盒
EZ-Blunt™ Ligation Kit是高效、便利的平末端DNA片段克隆专用试剂盒，用于克隆由Pfu、Pfx、Pwo、Phusion、Pyrobest或KOD等高保真DNA聚合酶催化反应的平末端PCR产物，以及限制性内切酶消化或DNA聚合酶补平得到的平末端线性DNA片段。EZ-Blunt™载体是基于pBlueScript II SK（+）质粒，经EcoRV酶切、纯化等处理后获得的平末端线性载体，具有5· -端磷酸根和3· -端羟基。EZBlunt™载体不含NdeI或NcoI限制性内切酶位点，故可用于克隆含上述酶切位点的基因；其多克隆位点适合于插入片段的亚克隆。
本试剂盒提供的EZ-Blunt™连接酶在高效连接的同时减少了使用普通DNA连接酶常见的载体自身环化问题，提高插入片段的连接效率。试剂盒还提供600 bp 平端PCR产物（EZ-Blunt™ Control Insert）作为连接反应的阳性对照。用本试剂盒克隆约1 kb大小PCR片段的蓝斑率（即自连率）通常低于30%。受载体自身大小的限制，本产品不适于克隆3 kb以上的PCR产物。DNA测序建议使用M13 Forward和M13 Reverse或T7 promoter和T3 promoter 通用型引物。
用途
· 无EcoRV位点的平末端PCR产物的克隆和测序
· 利用载体的酶切位点，方便亚克隆
· 利用lac promoter进行基因表达
特点
- 方便快捷：PCR产物无需加磷酸反应，直接连接
- 无NdeI或NcoI位点：便于重组表达基因的亚克隆
- 提供纯化的PCR片段作为阳性质控对照
- 蓝白筛选：高表达活性的β-半乳糖苷酶，显色更快更深
- 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测
产品组分
| EZ-Blunt™ Cloning Vector（40 ng/μl） | 20 μl |
| EZ-Blunt™ Control Insert（40 ng/μl） | 5 μl |
保存条件
−20℃恒温保存一年
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文献和实验ligation of the vector without any insert. If the background is low, there is no need for screening of the transformed cells for vector with ligated insert. c) For blunt end ligation (which is much less efficient compare to cohesive end ligation
Blunt end cloning of PCR products
% ethanol, dry and resuspend in 20 ul T4 PNK, 20 pmol ATP and 5-10 units T4 PNK. Incubate at 37 C for 1 hour. Ligation reaction: Blunt end ligation is carried out in the presence of 5% PEG 8000. A microgram of Bluescript SK+ is blunt ended (cut
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% ethanol, dry and resuspend in 20 ul T4 PNK, 20 pmol ATP and 5-10 units T4 PNK. Incubate at 37 C for 1 hour. Ligation reaction: Blunt end ligation is carried out in the presence of 5% PEG 8000. A microgram of Bluescript SK+ is blunt ended (cut
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