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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输及保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
Zero Background T Vector
- 库存:
大量
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
- 规格:
20次盒
本载体是经过独特改造的第二代T载体,用户只需在一个PCR引物上加上几个特 殊的碱基,即可零背景克隆和定向克隆,只有当PCR片段定向插入到本载体时,菌 落才能生长,其他所有情况(如载体自连、目标PCR片段的反向插入、非目标PCR 片段的正向和反向插入)下菌落均不能生长。
本产品特点如下:
1. 零背景,阳性克隆率接近100%。
2. 连接效率高,30分钟可完成连接反应。
3. 简单,无需使用IPTG/X-Gal进行蓝白筛选。
4. 连接产物可直接用于细菌转化。
5. 用途广,可用于PCR产物克隆、TA克隆、克隆后的DNA测序、定向克隆。
6. 提供引物一对,可直接用于菌落PCR检测。
克必隆零背景T载体使用及效果
使用步骤请参见产品使用手册。
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文献和实验领域。 二.工作原理: 2061C型气相色谱仪设计基于色谱分析与氢火焰离子化检测原理。由于氢火焰离子化检测器对有机化合物特别敏感,最小检测器可达10-9克,而对无机化合物无响应或响应很小。FID响应特性属于质量检测器,因此对温度、压力、流量等操作条件极不敏感,具有其他常用检测器无法比拟的操作特性,是目前气相色谱仪必配的检测器。值得指出的是,氢火焰离子化检测器也是目前气相色谱仪常用检测中唯一可以进水样的检测器。 三.主要技术指标: 1.柱恒温箱: 有效尺寸
克隆测序,各在不同部位有突变,于是我就从A克隆切一段接到B克隆上,又从C克隆切一段接B克隆上。注意的问题是GC比太高测序也很困难,正常GC能测1K左右,到了High GC就能测个五六百,这时要多准备些引物。 PCR产物的纯化 如果带很单一,又强,直接PCR产物纯化就可以,如果有杂带,但目的带也很强,跑胶,目的带切胶回收。回收这里也有个瓶颈,就是回收率的问题,我试过很多家的KIT,promega的GEL回收试剂盒效率和价格都很合适,推荐这个。 关于T载体,我在国内的时候是必
产物纯化就可以,如果有杂带,但目的带也很强,跑胶,目的带切胶回收。回收这里也有个瓶颈,就是回收率的问题,我试过很多家的KIT,promega的GEL回收试剂盒效率和价格都很合适,推荐这个。 关于T载体,我在国内的时候是必用的,到了美帝反倒一次没用过,这边比较流行直接用PCR产物切,就是回收完了直接切上,回收后然后连接,这又回到了最开始设计,要加保护碱基。这个策略好处就是免除了T载体这步,直接插入目的载体,存在的问题就是处于盲做状态,还要加保护碱基。 3. 酶切 我的原则一向是:尽量
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