- ¥390
- 康朗生物
- 大陆/美国
- KL213-01
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃恒温保存一年
- 保质期：
-20℃恒温保存一年
- 英文名：
StarScript II Two-step RT-PCR Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
ml/盒
【产品概述】
本产品是高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly(A) mRNA中高效率的合成第一链cDNA，并能够通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。该试剂盒使用重组表达的M-MuLV Reverse Transcriptase (RTase)，通过定点突变去除了RNase H的活性(RNase H－)，并增加了该酶与模板－引物的亲和力，具有更好的热稳定性，因此其DNA聚合酶的活性和持续合成能力均高于野生型M-MuLV RTase，合成的cDNA产量更多、更长。本试剂盒中的2×HiFiTaq PCR StarMix含PCR反应所需的GenStar HiFiTaq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分并对体系进行了优化，能有效扩增的10 kb以下片段，同时使用更快速简便。
【货号、规格及产品组分】
| 货号 | KL213-01 |
| 规格 | 20次 |
| StarScript II RTase (200 U/μl) | 20 μl |
| 5×RTase buffer* | 200 μl |
| RNase inhibitor (RNasin) | 16 μl |
| Oligo (dT)18 (50 mM) | 20 μl |
| Random Primer (50 mM) | 20 μl |
| 10 mMdNTP Mix | 30 μl |
| 2×HiFiTaq PCR StarMix | 500 μl |
| DNase/RNase-free ddH2O | 1 ml |
【保存条件】
-20℃恒温保存，有效期一年
【活性定义】
一个活性单位的逆转录酶定义为在37℃，10分钟条件下，使1 nmol 的脱氧核糖核酸掺入酸性沉淀物质所需的酶量。
【注意事项】
1. 实验过程中请注意避免RNase污染。
2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3. RNA模板的完整性对cDNA合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用GenStar TRIGene总RNA提取试剂 (货号P118-01) 制备高质量的RNA模板，并设置反转录反应阳性对照。
4. 由于所有的RNA提取方法都不能完全去除基因组DNA，所以应根据后续实验的需求，选择是否需要在反转录反应前去除残留基因组DNA。DNase I (货号A216-01) 处理的具体方法见本说明书附录。
5. StarScript II RTase以RNA为模板获得全长的第一链cDNA，其起始位点由所用引物所决定：
1) 随机引物 (Random Primer) 在RNA模板上没有特异性结合位点，所有RNA都可以做为第一链cDNA合成的模板；
2) Oligo dT Primer只能以poly(A) mRNA作为cDNA合成的模板；
3) 采用序列特异性引物 (GSP) 以其结合位点为起始位点。
6. StarScript II RTase合成的第一链cDNA产物可直接加入PCR反应混合物中进行扩增，但加入体积不应超过PCR反应总体系的10%，否则影响目的片段的产量。PCR扩增使用的耐热DNA聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
7. 第一链cDNA合成产物经过处理后可作为第二链合成的模板，合成含各种标记的cDNA，作为杂交实验的探针。
8. RNA可置于-70℃以下长期保存，cDNA合成产物可置于-20℃保存。
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